长链非编码RNA CYP4F29P在食管鳞状细胞癌中的功能及机制研究

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研究背景与目的:食管癌(EC)是常见的消化道肿瘤,其癌症致死率世界排名第六。虽然在手术、化疗和放疗方面取得了进展,但食管癌的死亡率仍然很高,即使在发达国家5年生存率也低于20%。食管鳞状细胞癌(ESCC)是食管癌的主要组织学类型,占所有癌症病例的90%。面对如此现状,研究人员仍然没有发现和改善食管鳞状细胞癌治疗的有效方法。因此需要对食管鳞状细胞癌肿瘤发生发展的分子机制进行更深层次的探究,为食管鳞状细胞癌患者的治疗提供新的有效治疗方法。在整个人类的基因转录本中仅仅有大约1.5%的基因转录本可以编码蛋白质,而其他大部分的基因转录本我们将其称之为非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA)。根据其转录本的长度,研究人员大致以200个核苷酸为界限将非编码RNA进行了归类,小于200个核苷酸的归一类,例如短干扰RNA(siRNA)、小核RNA(snRNA)和miRNA;而另一类则是大于200个核苷酸的长链非编码RNA(long non-coding RNA),其作为一种重要的生物调控手段近年来备受关注。在肿瘤领域当中,长链非编码RNA可以通过染色体修饰、可变剪切、调节转录等方法参与肿瘤的发生发展。即便如此,关于长链非编码RNA在食管鳞状细胞癌中的调控功能的深入研究还相对较少。因此,我们对此进行了深入的研究。研究方法:(1)数据挖掘,我们分别利用TCGAbiolinks、GEOquery包下载TCGA数据库和GEO数据库(GSE53625)中的食管鳞状细胞癌RNA-seq及基因芯片数据,并在GTEx数据库中获取人类食管组织RNA-seq的表达矩阵。(2)接着,我们通过联合分析RNA-seq和基因芯片数据筛选出在食管鳞状细胞癌组织和癌旁组织之间具有差异表达的4个候选lncRNAs。(3)通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术从候选的lncRNAs中筛选出目的长链非编码RNACYP4F29P。(4)通过慢病毒转导等相关技术构建差异表达目的长链非编码RNA的细胞系模型。(5)通过细胞增殖、集落形成、细胞周期和细胞凋亡等相关实验研究目的长链非编码RNA对体外食管鳞状细胞癌细胞表型的影响。(6)通过小鼠皮下成瘤、免疫组化检测和TUNEL染色实验探究目的长链非编码RNA在体内对食管鳞状细胞癌细胞的影响。(7)通过RNA pull-down和RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)实验来探究目的长链非编码RNA在食管鳞状细胞癌中参与的作用机制。(8)通过Western blot实验探究和验证目的长链非编码RNA对下游信号通路的影响。研究结果:通过生物信息学的数据分析,再经过本研究中临床样本的验证分析,在食管鳞状细胞癌中我们发现了显著低表达的lncRNA--CYP4F29P。细胞表型和动物实验结果表明,CYP4F29P能够促进ESCC细胞的凋亡和抑制ESCC细胞的增殖。我们还发现CYP4F29P能够与CDC25C相互结合并促进CDC25C的磷酸化,进而影响CDC25C的核质定位,阻碍CDC25C诱导Cyclin B/Cdc2复合物的激活,从而对食管鳞状细胞癌的发生发展造成影响。研究结论:我们研究鉴定出在食管癌鳞状细胞癌中显著低表达的lncRNA--CYP4F29P。CYP4F29P能够促进细胞凋亡,阻碍食管鳞状细胞癌的发生发展,为食管鳞状细胞癌患者的治疗提供新的手段。
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