补肾化痰祛瘀方对去卵巢大鼠子宫细胞凋亡因子Bcl-2、Bax、Cyto-C表达的影响

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目的:通过理论研究,探讨围绝经期综合征的病因病机、中医治疗现状及其与细胞凋亡的相关性;建立去卵巢动物模型,通过对去卵巢大鼠体重和子宫形态、血清性激素和血脂含量、子宫细胞凋亡及凋亡因子Bcl-2、Bax、Cyto-C的检测,探讨补肾化痰祛瘀方治疗围绝经期综合征的可能作用机制,为临床治疗提供更多的理论和实验依据。方法:健康6月龄SPF级雌性SD大鼠50只,随机分为空白对照组、假手术组、模型组、补肾化痰祛瘀组、利维爱组,共5组,每组10只。建立去卵巢动物模型,行阴道涂片检查,无角化者为双侧卵巢完全切除,即造模成功。给予空白对照组、假手术组和模型组0.9%氯化钠溶液,补肾化痰祛瘀组灌服940mg/ml药液,利维爱组灌服0.023mg/ml利维爱混悬液,1ml/100g。末次给药24小时后,大鼠行腹腔麻醉,麻醉满意后行心脏采血,尽量采集足够的血液放置于抗凝管中。在大鼠耻骨上方可见一“Y”型组织,即大鼠子宫组织,立即取出子宫,4%多聚甲醛固定,置于4°C冻存待用。计算去卵巢大鼠体重,采用HE染色法在显微镜下观察大鼠子宫形态,ELISA法检测大鼠血清中E2、FSH、LH和TC、TG、HDL-C、LDL-C的含量,IHC法检测大鼠子宫细胞Bcl-2、Bax、Cyto-C的蛋白表达,并进行定量分析,TUNEL法检测大鼠子宫细胞的凋亡率。结果:1、与假手术组相比,模型组大鼠体重显著增加,有显著性差异(P<0.05)。与模型组比较,补肾化痰祛瘀组和利维爱组大鼠体重显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。2、与假手术组比,模型组子宫明显缩小,子宫内膜萎缩变薄,腺体多呈低柱状、数量极少,肌层变薄,浆膜层萎缩、不光滑。与模型组比,补肾化痰祛瘀组子宫体积显著增大,为增生期子宫内膜,肌层规则,浆膜层光滑。3、与假手术组相比,模型组E2水平显著降低,FSH、LH水平明显升高,有显著性差异(P<0.01)。与模型组相比,补肾化痰祛瘀组和利维爱组均增加血清E2水平,两组血清FSH、LH水平均减少,有显著性差异(P<0.01或P<0.05)。4、与假手术组相比,模型组TC、TG、LDL-C含量显著提升,血清H DL-C水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。与模型组相比,补肾化痰祛瘀组和利维爱组均明显降低血清TC、TG、LDL-C水平,而两组血清HDL-C水平升高,有显著性差异(P<0.01或P<0.05)。5、与假手术组相比,模型组Bcl-2蛋白表达显著降低,Bax、CytoC的蛋白表达明显升高,有显著性差异(P<0.01)。与模型组比较,补肾化痰祛瘀组和利维爱组的Bcl-2蛋白表达显著升高,两组Bax、CytoC的蛋白表达下降,有显著性差异(P<0.01或P<0.05)。6、与假手术组相比,模型组细胞凋亡率显著升高,有显著性差异(P<0.05)。与模型组比较,补肾化痰祛瘀组和利维爱组的细胞凋亡率显著下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:补肾化痰祛瘀方能降低去卵巢大鼠的体重和改善子宫形态,能调节性激素水平和脂代谢,能上调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平,下调促凋亡蛋白Bax和Cyto-C的表达水平,降低子宫细胞的凋亡率,其作用机制很可能是通过调控Bcl-2/Bax/Cyto-C信号通路蛋白介导的细胞及线粒体凋亡。
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