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目的： 通过比较携带AFP、CEA、AFP和CEA抗原基因的重组腺相关病毒（recombinant adeno-associated virus，rAAV）载体转染树突状细胞（dendritic cell，DC）诱导产生的细胞毒性T淋巴细胞（cytotoxic T lymphocyte，CTL）体外对肝癌细胞及正常细胞的杀伤效果，同时观察DC诱导CTL过程中DC和T细胞的形态学变化，检测DC、T细胞表面分子及T细胞IFN-γ的表达率，初步探讨rAAV转染DC诱导的CTL对肝癌细胞的体外杀伤效应及机制，为其临床应用提供依据。 方法： 采集、分离健康人外周血单个核细胞（Peripheral Blood Mononuclear Cell，PBMC）用于制备DC及CTL。DC由细胞因子GM-CSF、IL-4、TNF-α及携带肿瘤抗原基因的重组腺相关病毒载体rAAV-AFP、rAAV-CEA、（rAAV-AFP+rAAV-CEA）分别刺激分化成熟，成熟DC与淋巴细胞混合诱导CTL产生。DC诱导CTL过程中DC和T细胞的形态学变化采用显微镜观察并拍照记录，DC表面分子CD80、CD83、CD86和T细胞表面分子CD4、CD8、CD25、CD69及IFN-γ的表达率采用流式细胞仪检测。MTS法检测rAAV-AFP、rAAV-CEA、（rAAV-AFP+rAAV-CEA）转染DC及未经病毒载体转染DC诱导产生的CTL体外对HepG2细胞及正常细胞的杀伤率，同时与加入抗人主要组织相容性复合体（major histocompatibility complex，MHC）I型单抗的CTL对HepG2细胞的杀伤率进行比较，探讨CTL杀伤作用的MHC限制性。 结果： 观察DC培养过程，DC体积逐渐增大，树突增多，逐渐分化、成熟，至第6天时，其表面CD80、CD83、CD86的表达率分别为42％、49%、81%；DC及淋巴细胞混合后，可见明显的成团趋势，培养第14天的T细胞表面CD4、CD25、CD8、CD69表达率分别为49%、5%、43%、33%，且可被刺激分泌IFN-γ。rAAV-AFP、rAAV-CEA、（rAAV-AFP+rAAV-CEA）转染DC诱导产生的CTL均能杀伤HepG2细胞，而对不表达相应肿瘤抗原的正常细胞无明显杀伤作用，差异具有统计学意义（P<0.05）；rAAV-AFP-DC-CTL与rAAV-CEA-DC-CTL对HepG2细胞的杀伤率分别为43%、34%，两者间无统计学差异（P=0.21）；（rAAV-AFP+rAAV-CEA）-DC-CTL对HepG2细胞的杀伤率更高，为53%，与rAAV-CEA-DC-CTL对比具有统计学差异（P=0.02），而与rAAV-AFP-DC-CTL对比无统计学差异（P=0.26）。未经rAAV转染DC诱导产生的CTL对肿瘤细胞也有杀伤作用，但显著小于 rAAV-DC-CTL（P<0.05）。加入抗 MHCⅠ型单抗的rAAV-DC-CTL对HepG2细胞的杀伤率明显下降，差异具有统计学意义（P<0.05）。 结论： rAAV转染的DC可成功诱导出肿瘤特异性的CTL，携带相应肿瘤抗原基因的rAAV转染DC诱导产生的CTL对肝癌细胞具有特异性杀伤作用，且两种携带肿瘤抗原基因的rAAV混合转染DC诱导产生的CTL对肝癌细胞的杀伤毒性更高，可能具有更好的临床应用前景。