【摘 要】
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本研究通过调查和采样,分析四川省蝉花生长密度与蝉花生长环境因子的关系,并对采集的蝉花菌进行分离、纯化与分类鉴定。测定了不同蝉花菌在Potato Dextrose Agar培养基（以下简称PDA培养基）、Czapek培养基、1/4 Sabouraud Dextrose Agar with Yeast Extract培养基（以下简称1/4 SDAY培养基）上的菌丝生长速率及产孢率情况。对其中菌丝生长速
【基金项目】
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陕西省农业科技创新转化项目（NYKJ-2019-YL37）；
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本研究通过调查和采样,分析四川省蝉花生长密度与蝉花生长环境因子的关系,并对采集的蝉花菌进行分离、纯化与分类鉴定。测定了不同蝉花菌在Potato Dextrose Agar培养基（以下简称PDA培养基）、Czapek培养基、1/4 Sabouraud Dextrose Agar with Yeast Extract培养基（以下简称1/4 SDAY培养基）上的菌丝生长速率及产孢率情况。对其中菌丝生长速率最快的蝉花菌株进行了人工培养基培养条件优化研究。取得的主要结果如下:（1）四川省蝉花产地:本研究确定了四川省具有5处产地,包括绵阳市安州区铜钱村、北川羌族自治区通泉镇战斗村、乐山市犍为县双溪镇半边山、南充市蓬安县长乐镇混沅寺村、广安市金城山森林公园。（2）四川省蝉花分布规律:四川省蝉花多生于竹林及针阔混交林带。四川省蝉花生长密度与光照、温度、坡度、以及相对湿度具有显著相关性。其中四川蝉花生长密度与光照呈线性递增关系;四川省蝉花生长密度与温度、坡度、相对湿度均呈“驼峰型”关系。（3）四川省蝉花资源种类与菌株的分离鉴定:本研究共分离纯化得到20株蝉花,经过菌落形态,分生孢子形态以及产孢结构、分子生物学等手段的鉴定,最终确定四川省蝉花菌共有2种:分别为大蝉草Cordyceps cicadae与小蝉草Cordyceps sobolifera。其中大蝉草的无性型为蝉拟青霉Paecilomyces cicadae,小蝉草的无性型为小蝉绿僵菌Ophiocordyceps sobolifera。（4）20株蝉花菌株在3种培养基上的生长性能比较:15株蝉拟青霉在培养基上菌丝长势情况依次为1/4 SDAY＞PDA＞Czapek培养基;其菌丝生长速率在1/4 SDAY和PDA培养基上生长最快、二者无显著差异,但均显著高于Czapek培养基上菌丝生长速率;产孢率依次为:PDA＞1/4 SDAY＞Czapek培养基。在人工培养基Czapek培养基上蝉拟青霉菌株TQZ-ZDC-7菌丝生长速率最快。小蝉绿僵菌在3种培养基中,只能在PDA培养基上生长,菌丝生长比较强壮、密集,其中菌株CLZ-HYS-2菌丝生长速率最快。后续人工培养条件优化研究选择菌株TQZ-ZDC-7和CLZ-HYS-2作为供试菌种。（5）蝉拟青霉菌株TQZ-ZDC-7的人工培养条件筛选:蝉拟青霉在全人工培养基上的最适碳氮比为30:1,在此碳氮比下的菌丝生长稠密强壮且菌丝生长速率显著高于其他组。最佳碳氮源为可溶性淀粉与玉米蛋白粉。（6）小蝉绿僵菌菌株CLZ-HYS-2的人工培养条件筛选:由于小蝉绿僵菌仅能在PDA培养基上生长,故本研究只对PDA培养基进行了改良。菌株CLZ-HYS-2在额外添加可溶性淀粉、甘油、蔗糖、麦麸、黄豆粉、酵母提取物各2.5g/L的改良PDA培养基上菌丝生长速率达到最大,且显著高于对照组。本研究对四川省各地蝉花资源状况进行了系统的调查,初步明确了其分布规律并分离获得了蝉花菌20个分离株。筛选出较为适宜人工培养的2株菌株蝉拟青霉菌株TQZ-ZDC-7和小蝉绿僵菌菌株CLZ-HYS-2,研究确定了二者的最优培养条件,并提出了针对性的半人工培养优化条件。以上研究结果有望为蝉花资源的保护与利用提供基础。
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