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重组人干扰素α2b(rh IFNα2b)是最早运用基因工程技术实现量产的细胞因子之一,临床上主要用于急慢性病毒性肝炎(乙型、丙型等)、尖锐湿疣、白血病、淋巴瘤、艾滋病相关性卡波济氏肉瘤、恶性黑色素瘤等的治疗。但因其用药间隔短,很多研究人员致力于开发长效干扰素制剂,聚乙二醇修饰技术是解决蛋白质药物半衰期短的有效手段之一。本学位论文采用分子量20KD的单甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺碳酸酯(m PEG-Succinimidyl Carbonate,m PEG-SC)对rh IFNα2b进行修饰,开发了能够获取高纯度聚乙二醇化重组人干扰素α2b(PEG-rh IFNα2b)的制备方法,并对所获产品进行了理化性质、生物学活性、稳定性等质量研究。(1)聚乙二醇化重组人干扰素α2b(PEG-rh IFNα2b)的制备和纯化。采用DOE试验设计,优化p H、投料比、rh IFNα2b浓度等参数,确定PEG-rh IFNα2b的制备工艺;以离子交换层析结合凝胶过滤层析纯化目标物。最优的工艺为:修饰反应在p H7.0、温度2～8℃、时间约4小时、rh IFNα2b浓度为1.8mg/ml～2.7mg/ml、投料比为2.2～3.0条件下,所获PEG-rh IFNα2b单体含量为44%以上;建立的阳离子交换层析、凝胶过滤层析两步纯化工艺,能有效去除修饰反应副产物NHS和副产物游离PEG,所获PEG-rh IFNα2b纯度在95%以上。(2)聚乙二醇化重组人干扰素α2b(PEG-rh IFNα2b)的理化性质和稳定性。所获PEG-rh IFNα2b相对分子质量为39206.6道尔顿,等电点为5.8～6.0,紫外最大吸收峰波长为280nm,电泳纯度为98.1%～98.4%,HPLC纯度为98.08%～99.74%,产品中未检出游离PEG;通过PEG-rh IFNα2b位置异构体电荷性质存在的微弱差异,采用离子交换高效液相色谱可有效分离出电泳条带位置一致的5个位置异构体;将PEG-rh IFNα2b分别置于2～8℃、25±2℃、37±2℃条件下,在不同时间点考察蛋白含量、电泳纯度、HPLC纯度、游离干扰素、比活性、游离PEG等指标,3批PEG-rh IFNα2b原液在2～8℃条件下保存时间12个月,在25℃±2℃条件下保存3个月,37℃±2℃条件下保存2个月,各项考察指标均符合规定,37℃贮存条件下放置3个月纯度检测不合格。(3)聚乙二醇化重组人干扰素α2b(PEG-rh IFNα2b)的生物活性。对《中国药典》中干扰素生物学活性测定法进行专属性和精密度考察。结果表明《中国药典》中收录的干扰素生物学活性测定法测定PEG-rh IFNα2b生物活性专属性强,溶媒和少量游离PEG对PEG-rh IFNα2b生物活性测定无干扰;精密度良好,RSD=14%(n=6)。