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目的:奶牛酮病和乳房炎是危害现代奶业最严重的疾病,且两者常伴发。沉默信息调控因子3（silent information regulator 3,SIRT3）是调控细胞能量代谢的关键分子,在围产期代谢相关疾病的发生发展过程中发挥重要作用,但其在奶牛乳腺组织的功能尚未见报道。本研究以酮病奶牛乳腺组织和奶牛乳腺上皮细胞（bovine mammary epithelial cells,BMEC）为实验材料,旨在从体内体外两条途径研究SIRT3对炎性通路的影响,为揭示酮病和乳房炎伴发的分子机制提供启示,进而为探寻药物防治新靶标奠定理论基础。方法:（1）采集15头临床酮病奶牛和15头健康奶牛的乳腺组织样本,采用Western-blot方法检测样本NF-κB信号通路激活以及SIRT3蛋白表达情况,采用qPCR方法检测样本炎性细胞因子mRNA表达;（2）选取泌乳中期（120±20 d）荷斯坦奶牛乳腺组织,采用组织块培养法分离培养、纯化原代BMEC,采用免疫荧光（immunofluorescence,IF）方法鉴定BMEC;（3）分别使用0、1.2、2.4、4.8 m Mβ-羟丁酸（β-hydroxybutyric acid,BHBA）处理BMEC 48 h,采用Western-blot方法检测SIRT3蛋白表达;（4）分别使用0 m M BHBA+0 m M乙酰乙酸（acetoacetic acid,ACAC）、1.2 m M BHBA+0.4 m M ACAC、2.4 m M BHBA+0.8 m M ACAC、4.8 m M BHBA+1.6 m M ACAC处理BMEC 48 h,采用Western-blot方法检测SIRT3蛋白表达;（5）分别使用0、0.6、1.2、2.4 m M非酯化脂肪酸（non-esterified fatty acids,NEFA）处理BMEC 24 h,采用Western-blot方法检测NF-κB信号通路激活以及SIRT3蛋白表达情况,采用qPCR方法检测炎性细胞因子mRNA表达;（6）转染SIRT3过表达腺病毒（Ad-SIRT3）+NEFA处理BMEC 24 h,采用Western-blot方法检测SIRT3对NF-κB信号通路激活的作用,采用qPCR方法检测SIRT3对炎性细胞因子mRNA表达的影响,采用IF方法检测SIRT3对NF-κB P65入核的影响。结果:（1）与健康奶牛相比,酮病奶牛乳腺组织p-NF-κB P65/NF-κB P65比值、白细胞介素1β（interleukin-1β,IL-1β）和白细胞介素6（interleukin-6,IL-6）mRNA表达均极显著上升（P＜0.01）,SIRT3/β-actin比值极显著下降（P＜0.01）;（2）纯化后细胞均高表达BMEC中特定骨架蛋白CK-18,证实为BMEC;（3）与空白对照相比,不同浓度BHBA处理BMEC SIRT3/β-actin比值差异均不显著（P＞0.05）;（4）与空白对照相比,不同浓度BHBA+ACAC处理BMEC SIRT3/β-actin比值差异均不显著（P＞0.05）;（5）NEFA处理BMEC p-NF-κB P65/NF-κB P65比值、IL-1βmRNA表达均随着NEFA浓度上升而上升,呈线性关系（Linear P＜0.01）,不存在二次相关（Quadratic P＞0.01）,IL-6 mRNA表达随着NEFA浓度上升而上升,呈线性关系（Linear P＜0.01）,且存在二次项关系（Quadratic P＜0.01）,SIRT3/β-actin比值随着NEFA浓度上升而下降,呈线性关系（Linear P＜0.01）,不存在二次相关（Quadratic P＞0.01）;（6）与空白对照相比,载体对照组（空白腺病毒转染组）p-NF-κB P65/NF-κB P65比值、SIRT3/β-actin比值、IL-1β和IL-6 mRNA表达差异均不显著（P＞0.05）。与载体对照组相比,Ad-SIRT3组p-NF-κB P65/NF-κB P65比值和IL-1βmRNA表达均显著下降（P＜0.05）,IL-6 mRNA表达极显著下降（P＜0.01）,SIRT3/β-actin比值显著上升（P＜0.05）;载体+NEFA组p-NF-κB P65/NF-κB P65比值、IL-1β和IL-6 mRNA表达均极显著上升（P＜0.01）,SIRT3/β-actin比值极显著下降（P＜0.01）。与载体+NEFA组相比,Ad-SIRT3+NEFA组p-NF-κB P65/NF-κB P65比值、IL-1β和IL-6 mRNA表达均极显著下降（P＜0.01）,SIRT3/β-actin比值极显著上升（P＜0.01）。载体+NEFA组细胞核内NF-κB P65荧光强度极显著增加（P＜0.01）;Ad-SIRT3组细胞核内NF-κB P65荧光强度极显著减少（P＜0.01）。与载体+NEFA组相比,Ad-SIRT3+NEFA组细胞核内NF-κB P65荧光强度极显著减少（P＜0.01）。结论:（1）酮病奶牛乳腺组织NF-κB信号通路被激活,炎性细胞因子表达上调,SIRT3表达下降;（2）BHBA与ACAC处理均对BMEC SIRT3表达无影响;（3）NEFA剂量依赖性地诱导BMEC炎性细胞因子表达,激活NF-κB通路,降低SIRT3表达;（4）SIRT3抑制NF-κB P65入核从而抑制高NEFA诱导的NF-κB信号通路激活,降低炎性细胞因子表达,抑制炎性反应发生。