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背景与目的:研究报道,异常表达的神经肽吻素（Kisspeptin）可能参与卵巢早衰、早发性卵巢功能不全等生殖疾病的发病机制。Kisspeptin是兼有中枢调控和外周调节作用的关键神经肽类信号因子。在中枢调控方面,既往研究结果发现Kisspeptin可在上游对Gn RH神经元进行调控,进而调节其下游垂体促性腺激素的分泌,从而参与调控下丘脑-垂体-卵巢轴。此外,在外周器官调控方面,卵巢的颗粒细胞、卵泡膜细胞、卵母细胞等也存在Kisspeptin表达及其相应受体,且近年来基础动物实验研究表明,向牛/猪等卵泡的培养液添加高浓度Kisspeptin可表现为卵巢储备功能减退（diminished ovarian reserve,DOR）改变,即卵巢中的窦卵泡数显著减少,甚至出现卵泡闭锁。进一步研究发现,卵泡液Kisspeptin水平异常升高可能通过上调促凋亡基因表达、下调抗凋亡基因表达,从而诱导牛/猪等颗粒细胞凋亡,其还可负向调控其卵泡表面卵泡刺激素受体（follicle-stimulating hormone receptor,FSHR）表达,使卵泡对FSH刺激作用的敏感性降低,抑制卵泡发育,从而影响卵母细胞及胚胎发育潜能。但目前Kisspeptin与DOR的相关临床研究却鲜有报道。因此,本研究分别从血清学和卵巢局部2个方面对Kisspeptin水平在DOR患者的变化及其潜在作用进行初步探索。本研究采用酶联免疫吸附试验法对血清基础神经肽吻素（basal Kisspeptin,b Kisspeptin）和卵泡液Kisspeptin水平进行检测,首先探讨血清b Kisspeptin水平在DOR不孕症患者中是否异常表达、是否与DOR具有相关性以及是否可能对DOR具有一定的诊断效能,其次探讨取卵日卵泡液Kisspeptin水平在高龄DOR不孕症患者是否异常表达及其是否可能影响此类患者优质胚胎形成,旨在为该领域后期进一步深入研究提供一定程度的理论参考。方法:1.收集2020年7月至2022年1月在河南省人民医院生殖医学中心初次就诊的174例不孕症患者的基础血清和临床资料。本研究已在河南省人民医院伦理委员会通过相关审核并批准（批件号:SYSZ-LL-2020091502）,患者亦已详尽阅读并签署本研究知情同意书。根据卵巢功能将研究对象分为DOR组（n=90）和卵巢储备功能正常者作为对照组（n=84）。SPSS 26.0用于本研究数据计算。计量资料用单样本Kolmogorov-Smirnov检验进行正态性检验,不满足正态分布,以[M（P25,P75）]表示,采用非参数检验比较两组患者血清b Kisspeptin、AMH、b FSH等基础性激素水平及超声下双侧卵巢窦卵泡数（antral follicle counting,AFC）。采用单因素及多因素Logistic回归分析评估DOR的相关因素。采用Spearman相关评估血清b Kisspeptin水平与其他卵巢储备功能参数的关联性。通过ROC曲线相关参数评估血清b Kisspeptin水平对DOR患者的诊断效能。2.收集同期于我院生殖医学中心首次经体外受精（in vitro fertilization,IVF）助孕的247例年龄≥35岁高龄DOR患者的卵泡液及临床资料,超促排卵均采用Gn RH拮抗剂方案,并肌注HCG 10000 IU扳机。本研究已在河南省人民医院伦理委员会通过相关审核并批准（批件号:SYSZ-LL-2020091503）,患者亦已详尽阅读并签署本研究知情同意书。根据是否获得卵裂期优质胚胎分为高龄DOR无优质胚胎组（优质胚胎数=0,n=117）和高龄DOR优质胚胎组130例（优质胚胎数≥1,n=130）。SPSS 26.0用于本研究数据计算。计量资料用单样本Kolmogorov-Smirnov检验进行正态性检验,不满足正态分布,以[M（P25,P75）]表示,采用非参数检验比较两组一般资料、促排卵参数、卵泡液Kisspeptin水平以及各胚胎参数。先经单因素Logistic回归分析初步筛选可能的影响因素,再经校正混杂因素的多因素Logistic回归分析评估此类患者卵裂期优质胚胎形成的独立影响因素。结果:1.血清b Kisspeptin水平在DOR组显著高于对照组[542.46（435.31,619.71）pg/ml vs.313.32（232.75,383.95）pg/ml,P＜0.001]。DOR组年龄[36.00（31.50,39.00）岁vs.33.00（29.00,37.00）岁,P＜0.05]、b FSH[10.44（8.59,13.19）IU/L vs.6.05（5.17,6.75）IU/L,P＜0.001]、b LH[4.80（3.81,6.81）IU/L vs.4.04（3.37,4.89）IU/L P＜0.05]水平较对照组明显升高;而DOR组AMH[0.68（0.48,1.02）ng/ml vs.2.36（1.71,3.07）ng/ml,P＜0.001]、AFC[4.00（2.00,5.00）个vs.11.00（8.00,14.00）个,P＜0.001]、b E2[35.64（28.12,49.46）pg/ml vs.45.34（33.73,58.89）pg/ml,P＜0.05]较对照组明显降低。2.单因素Logistic回归分析示:年龄、AMH、AFC、b FSH、b LH、b E2、b Kisspeptin均为DOR的相关因素（均P＜0.05）。3.以是否DOR为因变量,DOR患者赋值为1,卵巢储备功能正常者赋值为0,将年龄、AMH、AFC、b FSH、b LH、b E2、b Kisspeptin作为自变量纳入多因素Logistic回归分析,结果显示,血清b Kisspeptin水平（a OR=1.017,95%CI=1.003-1.031,P=0.016）、年龄（a OR=1.134,95%CI=1.002-1.284,P=0.046）、b FSH（a OR=4.428,95%CI=1.359-14.426,P=0.014）、AMH（a OR=0.002,95%CI=0.001-0.128,P=0.005）、AFC（a OR=0.143,95%CI=0.034-0.592,P=0.007）为DOR的独立相关因素。4.Spearman相关分析结果显示,DOR组血清b Kisspeptin与AMH、AFC呈明显负相关,Spearman相关系数分别为-0.620、-0.589（P＜0.001）;与年龄、b FSH、b LH呈明显正相关,Spearman相关系数分别为0.220、0.601、0.193（P＜0.05）。5.ROC曲线分析结果显示,血清b Kisspeptin鉴别DOR的AUC为0.915,根据其Youden指数计算得出,血清b Kisspeptin的最准确截断值为418.42 pg/ml,此时鉴别DOR的敏感度为78.82%,特异度为90.33%（P＜0.001）。6.卵泡液Kisspeptin水平在高龄DOR无优质胚胎组显著高于高龄DOR优质胚胎组[1074.03（940.12,1126.77）pg/ml vs.898.37（829.45,961.55）pg/ml,P＜0.001],高龄DOR无优质胚胎组HCG日LH水平显著高于高龄DOR优质胚胎组[3.94（2.40,7.11）IU/L vs.3.76（2.09,5.89）IU/L,P＜0.05];AMH[0.57（0.31,0.73）ng/ml vs.0.62（0.38,0.85）ng/ml,P＜0.05]、HCG日E2[449.40（294.95,699.85）pg/ml vs.597.85（435.80,889.73）pg/ml,P＜0.001]、HCG日≥14mm卵泡数[2.00（1.00,3.00）个vs.2.00（2.00,3.00）个,P＜0.001]、获卵数[2.00（1.00,3.00）个vs.3.00（2.00,4.00）个,P＜0.001]、MII卵数[2.00（1.00,3.00）个vs.2.50（2.00,4.00）个,P＜0.001]、正常受精数[1.00（0.00,2.00）个vs.2.00（1.00,3.00）个,P＜0.001]、卵裂期可用胚胎数[1.00（0.00,1.00）个vs.2.00（1.00,2.00）个,P＜0.001]均显著低于高龄DOR优质胚胎组。7.单因素Logistic回归分析示:卵泡液Kisspeptin、AMH、HCG日E2、HCG日LH、HCG日≥14mm卵泡数、获卵数、MII卵数、正常受精数、卵裂期可用胚胎数为卵裂期优质胚胎形成的影响因素（均P＜0.05）。8.以是否形成卵裂期优质胚胎为因变量,有优质胚胎赋值为1,无优质胚胎赋值为0,将卵泡液Kisspeptin、AMH、HCG日E2、HCG日LH、HCG日≥14mm卵泡数、获卵数、MII卵数、正常受精数、卵裂期可用胚胎数作为自变量纳入多因素Logistic回归分析,结果显示,卵泡液Kisspeptin水平（a OR=0.993,95%CI=0.991-0.996,P＜0.001）、卵裂期可用胚胎数（a OR=12.432,95%CI=5.219-29.615,P＜0.001）为卵裂期优质胚胎形成的独立影响因素。结论:1.DOR患者血清b Kisspeptin水平升高,并与卵巢储备功能指标AMH、AFC呈负相关,可能对DOR有一定的诊断价值。2.对于≥35岁高龄DOR不孕症患者,卵泡液Kisspeptin水平与胚胎质量低下有一定相关性,其水平增高可能影响卵裂期优质胚胎形成。