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目的:超声分子成像是一种能够敏感地检测血管内分子靶点的新兴技术,肿瘤血管生成的超声分子成像无论是在临床使用还是作为基础研究的工具,在肿瘤生物学和抗血管生成疗法上都有着巨大的潜力。本实验的研究目的是制备骨髓基质抗原蛋白2(Bone Marrow StromalCell Antigen2, BST2)靶向微泡造影剂,研究其与小鼠血管内皮细胞(bEnd.3)的体外黏附能力;并建立小鼠肿瘤模型,通过超声分子成像技术检测BST2靶向微泡造影剂在小鼠前列腺肿瘤血管内的成像,为肿瘤血管生成的检测及肿瘤治疗寻找新的靶点。方法:体外实验,制作细胞爬片,通过免疫细胞化学染色来检测BST2蛋白在小鼠血管内皮细胞中的表达,并用血小板内皮细胞黏附分子1(platelet endothelial cell adhesion molecule-1,CD31)做阳性对照;采用生物素-亲和素桥连技术制备BST2靶向脂质微泡,光学显微镜下观察BST2靶向微泡造影剂的形态,并采用AccuSizer780A粒径分析仪进行表征,显微镜下观察其与小鼠血管内皮细胞的结合特性及黏附率,同时以非靶向微泡作对照。体内实验,将小鼠前列腺癌细胞RM-1皮下接种于20只雄性C57小鼠腹部,建立小鼠肿瘤新生血管模型。实验小鼠分为:BST2靶向微泡组和非靶向微泡组;两组分别注射相同浓度的微泡,用Sequoia512超声成像系统对小鼠肿瘤新生血管进行超声分子成像,对比两组超声信号强度;尾静脉注射Lectin-FITC对肿瘤血管染色,10min后注射红色荧光标记的BST2靶向微泡造影剂,体内循环5min后,取肿瘤组织做冰冻切片,荧光显微镜下观察荧光微泡与血管的黏附情况,同时取注射了FITC-Lectin染肿瘤血管,而没有注射荧光微泡的肿瘤组织作对照;免疫组织化学染色检测BST2蛋白在小鼠肿瘤新生血管中的表达。结果:通过免疫细胞化学实验,CD31阳性对照的结果显示,BST2蛋白在小鼠血管内皮细胞中表达,并且其表达部位和强度与CD31很相近; bEnd.3细胞与BST2靶向微泡能够黏附,并且黏附率远远超过与非靶向微泡的黏附。超声分子成像的定量分析结果显示,BST2靶向微泡组在注射7min后可以保持注射30s时49.75%的超声信号强度,而非靶向微泡组仅仅能保持12.28%的信号强度;与非靶向组相比,靶向微泡在肿瘤部位信号强度提高了约4.05倍(P<0.01);荧光显微镜下观察到靶向微泡组的肿瘤组织冰冻切片在血管部位可以看到红色的荧光微泡;免疫组织化学染色结果显示,BST2蛋白在肿瘤血管部位有表达呈棕黄色或棕色颗粒。结论:采用生物素-亲和素桥连技术成功制备了BST2靶向脂质微泡,BST2靶向微泡能够和小鼠血管内皮细胞特异性的结合,且黏附率远远高于非靶向微泡黏附率。体内超声分子成像实验结果显示BST2靶向微泡能够特异性的黏附小鼠肿瘤模型的血管内皮细胞上,并且超声信号强度比非靶向微泡组的信号高出4.05倍;免疫组织化学染色,也证实了BST2蛋白在肿瘤血管部位有表达。因此,BST2靶向微泡可以用来检测小鼠肿瘤血管内皮细胞,有望作为超声成像检测肿瘤血管生成的新靶点,用于临床肿瘤的诊断及预后治疗。