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鲍姆木层孔菌Phellinus baumii，俗称桑黄菇、桑耳，是近年来开发的一种多年生药用真菌，最早收载于李时珍《本草纲目》中，《药性论》中称桑臣、桑耳。研究发现桑黄中存在一些抗氧化和抗肿瘤的活性成分；并且桑黄中的多糖和黄酮类化合物有重要的生物活性，在治疗癌症、保肝护肝、增强免疫、神经修复等方面有活性作用。然而在自然界中形成的子实体稀少，人工栽培难度较大，在国际医药市场上价格昂贵，限制了其进一步的开发利用。因此，菌丝体替代子实体发挥功效备受研究者的关注。本论文采用传统的液体发酵和创新固体发酵方法，培养桑黄菌丝体，对鲍姆木层孔菌同一菌株不同发酵方法培养得到的菌丝体醇提物进行了其活性成分的分离纯化和体外抑制肿瘤细胞生长及抗氧化的研究分析，为桑黄菌丝体的发酵和应用提供参考。具体研究内容分以下几部分：
1、收集了8种不同来源的桑黄菌株并采用ITS序列、HP LC指纹图谱分析进行了菌株鉴定和亲缘关系确定。采用优化的液体培养基（3.0%玉米粉，1.0%麸皮，0.7%豆饼粉，1.5%葡萄糖，0.1%KH2PO4，0.05%MgSO4·7H2O）在相同条件下培养8种不同来源的桑黄菌株，比较了其菌丝体醇提物抗氧化，抗肿瘤和抗衰老的生物活性。结果发现，不同来源的桑黄菌种在总黄酮含量和生物活性方面差异较大，其中SH1菌株抗氧化活性较高，500μg/mL时超氧阴离子清除率就达到75%；SH1和SHA菌株抑制肿瘤细胞K562的活性较高。SH1菌株在液体培养过程中长势较其他菌株好，活力较高。筛选做为后续研究的目标菌株。
2、利用液体发酵、木屑固体发酵和米饭固体发酵三种方式培养桑黄菌丝体，对菌丝体醇提物的体外抗氧化、抗肿瘤和抗衰老生物活性进行了研究。结果发现，木屑固体发酵、液体发酵和米饭固体发酵的菌丝体醇提物清除H2O2自由基的IC50值分别为78.28±0.32、27.73±0.57和7.84±0.37；米饭培养的桑黄菌丝体醇提物在低浓度500μg/mL下对超氧阴离子自由基清除作用到达80%，在相同的浓度下对DPPH自由基清除率也明显高于其它两种方法，表现出较高的抗氧化活性。木屑以及米饭培养方法得到的菌丝体对PC12神经细胞损伤修复均有较好的效果，液体培养的桑黄菌丝体表现的修复作用较低；液体发酵培养的菌丝体醇提物浓度在100μg/mL时，对肿瘤细胞HepG2的抑制率到达70%，高于其他两种培养方法的抑制作用。
3、采用有机溶剂萃取、硅胶柱分离和高速逆流色谱法对固体发酵培养的桑黄菌丝体醇提物进行了分离纯化，经硅胶柱分离纯化出6个化合物,利用红外光谱（IR）、紫外光谱（UV），质谱（MS）及核磁共振技术（NMR）对分离纯化出的化合物进行了结构解析。化合物分别为Ergoste ro l麦角甾醇，Ergosta-7,22-dien-3β-yl pentadecanoate，原儿茶醛Benzaldehyde,3,4-dihydroxy-,3,4-二羟基苯甲醛；经高速逆流色谱法结合硅胶柱层析纯化出7个化合物，其中得到三个黄酮类化合物，RF12结构未解出，化合物分别为Inoscavin A，24-Ethylcholesta-5,22-dien-3beta-ol，Baicalein，Naringenine-7-rhamnosidoglucoside，Benzaldehyde,3,4-dihydroxy-,3,4-二羟基苯甲醛。对得到的化合物进行了体外抑制肿瘤细胞生长和抗氧化活性实验，结果表明：Benzaldehyde,3,4-dihydroxy-,3,4-二羟基苯甲醛RF6，Inoscavin A RF7，Naringenine-7-rhamnosidoglucoside YF9，Baicalein MF10在抗肿瘤和抗氧化实验中都表现出较好的活性。在对K562细胞的抑制实验中，在浓度100μg/mL时，样品RF7，MF10和RF11的抑制率几乎都能达到100%，对K562细胞的抑制作用效果明显。在清除过氧化氢实验中，YF9和MF10在浓度80μg/mL时，清除率就达到70%左右。
1、收集了8种不同来源的桑黄菌株并采用ITS序列、HP LC指纹图谱分析进行了菌株鉴定和亲缘关系确定。采用优化的液体培养基（3.0%玉米粉，1.0%麸皮，0.7%豆饼粉，1.5%葡萄糖，0.1%KH2PO4，0.05%MgSO4·7H2O）在相同条件下培养8种不同来源的桑黄菌株，比较了其菌丝体醇提物抗氧化，抗肿瘤和抗衰老的生物活性。结果发现，不同来源的桑黄菌种在总黄酮含量和生物活性方面差异较大，其中SH1菌株抗氧化活性较高，500μg/mL时超氧阴离子清除率就达到75%；SH1和SHA菌株抑制肿瘤细胞K562的活性较高。SH1菌株在液体培养过程中长势较其他菌株好，活力较高。筛选做为后续研究的目标菌株。
2、利用液体发酵、木屑固体发酵和米饭固体发酵三种方式培养桑黄菌丝体，对菌丝体醇提物的体外抗氧化、抗肿瘤和抗衰老生物活性进行了研究。结果发现，木屑固体发酵、液体发酵和米饭固体发酵的菌丝体醇提物清除H2O2自由基的IC50值分别为78.28±0.32、27.73±0.57和7.84±0.37；米饭培养的桑黄菌丝体醇提物在低浓度500μg/mL下对超氧阴离子自由基清除作用到达80%，在相同的浓度下对DPPH自由基清除率也明显高于其它两种方法，表现出较高的抗氧化活性。木屑以及米饭培养方法得到的菌丝体对PC12神经细胞损伤修复均有较好的效果，液体培养的桑黄菌丝体表现的修复作用较低；液体发酵培养的菌丝体醇提物浓度在100μg/mL时，对肿瘤细胞HepG2的抑制率到达70%，高于其他两种培养方法的抑制作用。
3、采用有机溶剂萃取、硅胶柱分离和高速逆流色谱法对固体发酵培养的桑黄菌丝体醇提物进行了分离纯化，经硅胶柱分离纯化出6个化合物,利用红外光谱（IR）、紫外光谱（UV），质谱（MS）及核磁共振技术（NMR）对分离纯化出的化合物进行了结构解析。化合物分别为Ergoste ro l麦角甾醇，Ergosta-7,22-dien-3β-yl pentadecanoate，原儿茶醛Benzaldehyde,3,4-dihydroxy-,3,4-二羟基苯甲醛；经高速逆流色谱法结合硅胶柱层析纯化出7个化合物，其中得到三个黄酮类化合物，RF12结构未解出，化合物分别为Inoscavin A，24-Ethylcholesta-5,22-dien-3beta-ol，Baicalein，Naringenine-7-rhamnosidoglucoside，Benzaldehyde,3,4-dihydroxy-,3,4-二羟基苯甲醛。对得到的化合物进行了体外抑制肿瘤细胞生长和抗氧化活性实验，结果表明：Benzaldehyde,3,4-dihydroxy-,3,4-二羟基苯甲醛RF6，Inoscavin A RF7，Naringenine-7-rhamnosidoglucoside YF9，Baicalein MF10在抗肿瘤和抗氧化实验中都表现出较好的活性。在对K562细胞的抑制实验中，在浓度100μg/mL时，样品RF7，MF10和RF11的抑制率几乎都能达到100%，对K562细胞的抑制作用效果明显。在清除过氧化氢实验中，YF9和MF10在浓度80μg/mL时，清除率就达到70%左右。