[研究目的]绝经主要是由于卵巢功能衰退和雌激素水平降低所致。雌激素作为内环境的一个因素,影响全身各系统的生理功能,是女性保持健康必不可少的内分泌激素。研究发现,女性绝经前,心血管疾病的发生率低于男性；而绝经后,心血管疾病如动脉粥样硬化,冠心病发病率迅速增加,并随年龄的增长呈指数上升,故绝经前体内的雌激素可能是保护妇女免于心血管疾病的重要原因。但绝经后心血管功能异常的机制并不十分明确,替代治疗效果也不是十分满意。研究证实,慢性心衰、高血压等心血管疾病的发生与交感神经兴奋性增强有关。血压升高与交感兴奋性增强是心血管疾病的主要病理改变。而调节交感神经活动与血压变化的关键中枢位于脑干的头端延髓腹外侧区(rostral ventrolateral medulla RVLM).已有文献报道,在心血管疾病状态中RVLM神经元功能异常是导致交感活动亢进的重要机制,抑制交感神经元活动能有效降低血压。氧化应激是指机体在遭受各种有害刺激时,体内超氧化物如活性氧族(ROS)、活性氮族(RNS)在体内产生和清除失衡,从而导致超氧化物聚集,引起机体损伤。无论外周还是中枢,氧化应激在调节心血管功能方面发挥了一定作用。在针对心血管功能外周调节方面的研究已经证实绝期后动物和人体其体内氧化应激水平增加,而且绝经后雌激素替代治疗能明显降低体内的氧化应激水平,并导致血压下降。另有研究表明：交感活动的激活、血压升高与RVLM内氧化应激后活性氧的增加密切相关。本研究的第一个目标是明确在OVX大鼠RVLM水平上,氧化应激是否参与绝经后心血管功能的异常调节及雌激素低下对RVLM氧化应激的作用。在交感输出亢进的高血压和心力衰竭等动物模型上发现RVLM内生成和降低氧化应激活性氧族主要成分超氧阴离子·O2-的NADPH氧化酶(NOX4)和过氧化物歧化酶SOD的活性和表达分别增强和降低。·02-通过影响细胞膜上的离子通道或通过细胞内信号转导通路增加神经元的兴奋性,进而导致血压升高和交感神经兴奋性增加等心血管功能异常表现。那么雌激素能否通过影响RVLM内NADPH氧化酶或SOD的活性通路介导的氧化应激的途径实现其中枢抗高血压和抑制交感神经活动的作用。因此本研究主要观察是雌激素减弱RVLM中氧化应激水平与抗高血压的机制,进而研究发挥该心血管调节效应的分子通路,为绝经后心血管功能异常的形成和发展机制研究提供重要的理论内容。[研究方法]实验动物采用Sprague-Dawley(SD)雌性大鼠,体重约190-230g。实验组行卵巢去势手术,对照组做假手术。所有实验动物分为四组：Sham+Veh组、sham+E2组、OVX+Veh组与OVX+E2组；OVX组大鼠术后正常饲养四周后,每天按照30μg/kg颈部皮下给予雌激素(溶于生理盐水,购自于Sigma公司),以生理盐水作为溶剂(Vehicle, Veh)对照,雌激素替代治疗4周后,整体动物水平监测大鼠血压、心率、24小时尿液去甲肾上腺素含量,DHE荧光探针染色及光泽精检测RVLM区超氧阴离子含量,western blot检测氧化应激有关的蛋白N0X4、SOD1的改变。[结果]一、动物模型评价OVX+Veh组大鼠与Sham+Veh组相比,子宫体重比明显下降(0.0004±0.0001 vs0.0018±0.0004mg/g)。OVX+Veh组大鼠血中雌激素含量明显降低(9.667±.374 pmol/L vs 5.358±.165 pmol/L),可认为模型建立成功。给予雌激素E2替代治疗(30μg/kg.d)一月后,可显著改善子宫萎缩情况,子宫体重比较OVX+Veh组明显增高。二、雌激素对OVX大鼠心血管活动的影响OVX术后的大鼠,血压、心率及肾交感放电活动明显增加,24小时尿中去甲肾上腺素(间接反映了肾交感活动性的变化)含量增高。给予激素替代治疗后,与OVX+Veh组相比,血压上升、心率增快,肾交感神经活动增强的效应均被逆转。三、雌激素可以减少RVLM区内超氧阴离子的含量染色探针DHE定性检测超氧化物的含量,而光泽精可以定量检测超氧阴离子的含量。在OVX手术后,DHE染色和光泽精检测结果显示,OVX+Veh组的RVLM内超氧阴离子的含量与对照Sham+Veh组RVLM内超氧阴离子的含量相比明显增多(P<0.05)。给予激素替代治疗后,与OVX+Veh组相比,RVLM区内超氧阴离子的含量减少。四、雌激素可以下调NADPH氧化酶(Nox4)蛋白表达,上调SOD1蛋白达OVX+Veh组大鼠与Sham+Veh相比SOD1含量明显下降,Nox4表达含量明显升高,激素替代治疗后,SOD1表达含量升高,Nox4表达含量下降。而对于Sham组大鼠无论有无雌激素替代治疗,SOD1、NADPH氧化酶蛋白表达水平均无明显变化。[结论]雌激素可通过降低RVLM氧化应激抑制交感亢进从而改善大鼠绝经后心血管功能。