甜瓜CmMAPK、CmBADH、CmP5CS基因的克隆、表达分析及遗传转化

来源 :山东农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:potato_212
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甜瓜(Cucumis melo L.)是世界上重要的园艺作物之一,土壤次生盐渍化、急剧变化的气候环境等成为其栽培种植的障碍之一。研究甜瓜胁迫响应的相关基因并进行克隆和表达分析,对揭示甜瓜的耐胁迫机制和改良具有重要的意义。本研究从甜瓜自交系TS-2中克隆到脯氨酸合成过程中关键限速酶基因CmP5CS、甜菜碱合成过程关键限速酶基因CmBADH和逆境胁迫信号转导途径MAPK级联系统途径中MAP激酶基因CmMAPK的全长cDNA序列,并对该基因进行了表达特性分析和遗传转化研究。主要研究结果如下:(1)根据GenBank中登记的其他植物氨基酸的保守序列设计兼并引物通过RT-PCR和RACE技术从甜瓜TS-2克隆到了MAPK、BADH、P5CS基因,MAPK基因全长1391bp,编码371个氨基酸,GenBank登记号:JF820842;BADH基因全长1856bp,编码504个氨基酸,GenBank登记号:JN091961;P5cs基因全长2761bp,编码718个氨基酸,GenBank登记号:JN590050。(2)利用qPCR进行了CmMAPK、CmBADH、CmP5CS基因的表达分析,结果表明:盐、干旱、高温、低温均可诱导CmBADH、CmP5CS基因的表达,呈现先上升后下降的趋势;盐、干旱、低温均可诱导CmMAPK基因的表达,呈现先上升后下降的趋势,而高温不诱导其表达;ABA均诱导CmBADH、CmP5CS基因的表达,呈现上升的趋势。(3)采用磺基水杨酸法测定不同处理下的脯氨酸含量,结果表明:盐、干旱、高温、低温、ABA处理下均脯氨酸含量均有不同程度的提高。(4)构建了CmMAPK、CmP5CS的反义植物表达载体,利用农杆菌介导法将正、反义表达载体分别对甜瓜进行了遗传转化,已成功获得组培苗。
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