柑橘在我国农业经济上具有重要地位,柑橘的优质丰产是其在国际柑橘市场上的核心竞争力。无核一直是柑橘育种追求的目标性状。细胞融合技术,为柑橘无核育种提供了一条快捷的途径,即通过融合单倍体(n)原生质体与二倍体(2n)原生质体获得三倍体。基于这一思路,本研究利用‘早金’甜橙单倍体愈伤系与其它6个二倍体有核柑橘品种的叶肉或愈伤亲本融合,旨在获得综合双亲优点的三倍体新种质。另外,本研究采用SSR分子标记对实验室前期获得的一批融合再生植株进行了倍性和遗传分析。主要研究结果如下:1.单倍体愈伤原生质体+二倍体叶肉原生质体融合创制三倍体。以‘早金’甜橙单倍体愈伤系Fa为亲本,分别与6个二倍体种间良种的叶肉原生质体融合。各组合融合产物在后期培养过程中均逐渐死亡,经多次(每个组合至少3次)尝试都未再生成功,表明单倍体愈伤原生质体与二倍体叶肉原生质体融合较难再生。2.单倍体愈伤原生质体+二倍体愈伤原生质体融合创制三倍体。分别以‘早金’甜橙单倍体愈伤系Fa、Ec为亲本,与‘默科特’橘橙(MCK)愈伤组织原生质体融合,得到Fa+MCK组合的再生愈伤组织,倍性测定为二倍体与四倍体的混倍体,得到Ec+MCK组合的再生愈伤组织、胚状体,倍性测定为五倍体。3.3个组合融合产物的再生与倍性分析。本研究对实验室前期留下的G1+‘卡特’夏橙、G1+‘Itabori’甜橙、G1+‘默科特’橘橙三个组合的融合产物进行后续培养,最终分别成功获得G1+‘卡特’夏橙、G1+‘Itabori’甜橙、G1+‘默科特’橘橙再生植株31株、14株、4株。经流式细胞仪倍性检测,3个组合的所有再生植株均为四倍体。4.3个组合再生植株的遗传鉴定。采用SSR分子标记,分别对G1+‘卡特’夏橙、G1+‘Itabori’甜橙、G1+‘默科特’橘橙3个组合的再生植株进行胞质基因组、核基因组的遗传来源鉴定,结果表明:3个组合的再生植株都为四倍体体细胞杂种,其核基因组来源于两方亲本,同时可能发生了一定程度的重组交换,G1+‘卡特’夏橙、G1+‘Itabori’甜橙两个组合的线粒体和叶绿体基因组都来自于G1。