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根据GenBank中已发表的序列,设计针对猪伪狂犬病病毒TK基因和猪细小病毒VP2基因的特异性引物,参考有关文献得到扩增猪圆环病毒2型ORF2基因的引物,建立针对上述三种病毒的多重PCR方法,可在一次PCR反应中扩增出相应的277bp、511bp和404bp的目的片段。同时,针对猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因和猪瘟病毒NS5A基因,设计特异性引物,建立针对上述两种RNA病毒的多重RT-PCR方法,可同时扩增出相应的876bp和465bp的目的片段。实验结果表明这两个多重PCR方法特异、敏感、快速,具有广阔的应用前景。应用上述两个多重PCR方法,对来自江苏地区的211份猪高热病病料进行检测,结果显示93份病料为PCV2阳性,阳性率为44.1%;8份病料为PPV阳性,阳性率为3.9%;5份病料为PRV阳性,阳性率为2.4%;108份病料为PRRSV阳性,阳性率为51.2%;22份病料为HCV阳性,阳性率为10.4%。其中,混合感染PCV2、PRRSV和HCV的病料有11份,占病料总数的5.4%;混合感染PCV2、PRRSV和PRV的病料有1份,占总数的0.5%;混合感染PCV2和PRRSV的病料有54份,占总数的25.6%;混合感染PRRSV和HCV的病料有5份,占病料总数的2.4%;混合感染PCV2和HCV的病料有4份,占总数的1.9%;混合感染PCV2和PPV的病料有7份,占总数的3.4%;混合感染PCV2和PRV的病料有2份,占总数的1.0%;混合感染HCV和PRV的病料有1份,占总数的0.5%。统计数据发现,2005年病料中PCV2的阳性率为21.2%,2006年为73.2%;2005年PRRSV的阳性率为38.1%,2006年为67.7%,这两种病毒的阳性率上升明显,而另外3种病毒的阳性率变化不大。通过流行病学调查,表明PRRS和PCVD在江苏地区呈流行趋势,混合感染多发。对05年、06年分离于江苏地区的PRRSV毒株的ORF5基因测序。结果表明,所有毒株ORF5基因大小均为603bp。将本试验所分离的毒株与国外美洲型毒株相比,发现ORF5序列同源性为84.5%-92.2%,而与国内毒株的同源性为96.8%-99.8%,与欧洲型毒株之间的同源性比较低,为59.8%-61.8%。05年、06年江苏地区PRRSV分离株ORF5基因间的同源性为96.9%-99.8%。同时将2005年、2006年分离到的各3个毒株Nsp2部分核苷酸序列与GenBank中已发表序列进行比较,发现2006年分离到PRRSV Nsp2核苷酸序列都有87个碱基的缺失,所测其余部分的同源性高达97.9%-98.9%;2005年所分离到的3个毒株Nsp2核苷酸序列没有缺失,彼此之间的同源性为96.5%-98.5%。结果表明,江苏地区PRRSV分离株ORF5序列同源性非常高,而2006年分离的PRRSV Nsp2核苷酸序列有87个碱基的缺失,由此产生的生物学意义,有待于进一步研究。