背景与目的结直肠癌（Colorectal cancer,CRC）在全世界恶性肿瘤发病率中位列第三位,也是导致肿瘤相关死亡的第二常见原因。近些年来,结直肠癌的罹患率逐渐升高,严重威胁到了人类的身心健康。目前对结直肠癌患者的治疗方法以外科手术、系统放化疗、靶向治疗和免疫治疗为主,但对于肿瘤TNM分期相同的癌症患者,采用同一种治疗方案,临床结局却表现出较大的个体差异性。目前迫切研究新的的生物标志物对其结直肠癌的诊疗和预后预测具有重大意义。国外研究中发现钙连蛋白（Calnexin,CANX）、四连接同源基因（Four jointed box 1,FJX1）与肿瘤关系密切,在多种类型的癌种中表达上调,可作为靶向治疗和与预后有关的潜在分子指标,同时也为结直肠癌的相关研究提供新的方向。CANX是细胞内重要的分子伴侣蛋白,辅助糖蛋白在内质网（Endoplasmic reticulum,ER）中正确折叠。研究证明CANX蛋白可以缓解内质网应激反应,提高细胞抗应激能力,但同时也会抑制肿瘤细胞凋亡,促进癌症的发生。此外,CANX可以抑制机体的抗肿瘤免疫反应,例如在口腔鳞状细胞癌、黑色素瘤中CANX过表达抑制T细胞浸润和CD4+、CD8+T细胞增殖和效应功能,在促进肿瘤生长方面发挥了中心作用,且与患者的不良预后呈正相关。FJX1与果蝇高尔基体固有跨膜激酶FJ（four-jointed）高度同源,在人类正常组织中微量表达或者不表达。虽然FJX1在人类肿瘤中的致癌机制尚不明确,但在某些肿瘤中比如鼻咽癌已经证实FJX1通过癌症相关信号促进了肿瘤细胞的增殖和侵袭。目前关于CANX、FJX1与结直肠癌之间的关系较少报道,本研究拟利用TCGA中的结直肠癌数据来分析CANX、FJX1 mRNA的表达以及参与的信号通路和生物学功能,然后采用免疫组织化学（IHC）的方法对两种蛋白在结直肠癌中的表达及与预后的关系进行分析。目的是寻找与结直肠癌相关的潜在治疗靶点以预后判断指标。研究方法1 生信分析应用癌症和肿瘤基因图谱（TCGA）数据库下载获取结直肠腺癌mRNA表达数据和临床数据,运用R/Bioconductor package limma软件分析CANX、FJX1 mRNA在结直肠腺癌组织和正常组织中的表达差异,差异表达的阈值为P＜0.05;KEGG富集分析与CANX、FJX1相关的信号通路;GO富集分析CANX、FJX1的生物学功能;富集显著性的阈值为FDR（p.adjust）＜0.05。2 免疫组化选取郑州大学第二附属医院病理科2016年1月1日至2017年3月1日结直肠腺癌根治性切除的40例患者的石蜡包埋组织标本,对应癌旁组织作为对照。应用IHC的方式进行染色。3 统计方法两组样本率比较采用χ2检验;Kaplan-Meier法进行DFS生存分析,对DFS的影响因素进行Cox单因素和多因素回归分析。P＜0.05为存在统计学意义。结果1 生信结果1.1 TCGA基因表达量分析显示,CANX、FJX1 mRNA在结直肠癌组织的表达水平均高于正常组织,差异具有统计学意义（P＜0.05）。1.2 KEGG富集结果显示,CANX基因高表达组相关信号通路主要富集于TGF-β信号通路、Wnt信号通路、p53信号通路和癌症通路（FDR＜0.05）;FJX1基因高表达组相关信号通路主要富集于ECM受体相互作用、Hedgehog信号通路、补体凝集素途径和一些癌症通路（FDR＜0.05）。1.3 GO富集结果显示,CANX生物过程（biological process,BP）主要在蛋白质的折叠和分泌、内质网未折叠蛋白反应、突触囊泡内吞、IL-27介导的信号通路等过程富集;分子功能（Molecular Function,MF）主要在糖蛋白的结合、未折叠蛋白的结合、载脂蛋白的结合等功能富集;细胞组成（Cellular Component,CC）主要在内质网、树突细胞质等成分富集（FDR＜0.05）。FJX1生物学过程主要在细胞间信号、视网膜层形成过程富集（FDR＜0.05）。2 免疫组化结果2.1 40例结直肠癌组织中,CANX蛋白表达阳性者23例（57.5%）;40例癌旁组织中,CANX蛋白表达阳性者13例（32.5%）。组间差异具有统计学意义（P=0.025）。40例结直肠癌组织中,FJX1蛋白表达阳性者26例（65.0%）;40例癌旁组织中,FJX1蛋白表达均为阴性。组间差异具有统计学意义（P=0.000）。2.2 CANX蛋白表达与患者的TNM分期具有统计学差异（P=0.037）,与患者年龄、性别、分化程度、肿瘤部位、糖尿病史无统计学差异。FJX1蛋白表达与患者的分化程度（P=0.002）、TNM分期（P=0.048）具有统计学差异,与患者年龄、性别、肿瘤部位、糖尿病史无统计学差异。2.3 生存分析显示,CANX蛋白表达阴性组DFS可能优于CANX蛋白表达阳性组,组间差异具有统计学意义（P=0.021）。FJX1蛋白表达阴性组DFS可能优于FJX1蛋白表达阳性组,组间差异具有统计学意义（P=0.032）。2.4 Cox单因素分析显示,TNM分期（P=0.007）、CANX蛋白表达（P=0.035）、FJX1蛋白表达（P=0.046）可能为患者DFS的影响因素;Cox多因素分析显示,CANX蛋白表达（P=0.030）、TNM分期（P=0.011）可能为影响患者DFS的独立危险因素。结论1.生物信息学分析显示,CANX、FJX1基因可能参与了结直肠癌的发生发展。2.CANX蛋白表达可能与患者TNM分期有关;FJX1蛋白表达可能与患者TNM分期、分化程度有关。CANX、FJX1蛋白表达可能与患者预后不良有关。3.CANX蛋白表达、TNM分期可能为影响结直肠癌患者术后DFS的独立危险因素。