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金黄色葡萄球菌是临床重要的致病菌,耐甲氧西林金葡菌(MRSA)使得金葡菌感染的病死率增加,成为院内感染的最常见致病菌。社区获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Community acquired methicillin-resistant Staphylococcusaureus,CA—MRSA)自上世纪末开始,相继出现报道。目的:了解天津地区CA—MRSA临床株的遗传学特点,包括:检测它们的耐药表型、pvl基因的携带情况、SCCmec分型和MLST分型。为临床诊断、预防和治疗奠定基础。方法:(1)菌株收集与药敏检测:收集自2001年—2006年天津市四家三级甲等医院金葡菌,其中15株金葡菌鼻腔携带株、125株金葡菌临床株。依据CA—MRSA的概念将临床株分成CA—MRSA和医院获得MRSA(HA—MRSA)。采用头孢西丁纸片法,检测MRSA。应用微量肉汤稀释法检测金葡菌对12中抗生素(包括:青霉素、苯唑西林、氨苄西林、环丙沙星、莫西沙星、头孢唑啉、氯霉素、林可霉素、庆大霉素、头孢曲松、万古霉素和红霉素)的MIC,分析其耐药率。(2)金葡菌的pvl筛检:应用PCR方法,对全部金葡菌检测pvl基因,并对PCR阳性的扩增产物进行DNA序列分析。(3)金葡菌的SCCmec分型:参照Olivera等的文献报道合成引物。对CA—MRSA和HA—MRSA菌株应用多重PCR方法,进行SCCmec分型。(4)金葡菌的MLST分析:扩增金葡菌的7个高度保守的看家基因,将扩增的序列片段进行DNA序列分析。将分析结果提交国际数据库网站http://saureus.mlst.net进行比对,最终获得菌株ST分型。结果:(1)MRSA的检测:132例健康查体者鼻腔携带菌株中,筛检出15例金葡菌携带株。金葡菌携带率为11.36%。其中,经头孢西丁纸片法检测,15例携带株均为MSSA。在健康查体者中,没有发现MRSA鼻腔携带株。在125株金葡菌临床株中MRSA54株,依据临床资料分成12株CA-MRSA和42株HA—MRSA。应用微量肉汤稀释法,检测对12种抗生素的MIC。其中,42株HA—MRSA除对万古霉素敏感外,对其他11种抗生素均有较高的耐药率,呈现多重耐药的表型。而12株CA—MRSA除对β—内酰胺类抗生素有很高的耐药率外,对非β—内酰胺类抗生素耐药率较低。在15株携带株中,对青霉素耐药率较高,对林可霉素和红霉素也有中等程度的耐药,对其他类抗生素仍较敏感。(2)pvl基因PCR方法检测:检测125株临床株和15株携带株的pvl基因。结果仅检出pvl基因阳性菌株3株。pvl基因检出率较低(3/140)。其中1株是从CA—MRSA中检出,来自脓液,另外2株为MSSA,来自痰液。(3)SCCmec分型:用多重PCR方法,对12株CA—MRSA和42株HA—MRSA进行SCCmec分型。在12株CA—MRSA中,除1株未定型外,其余11株均属于SCCmecⅣ型;在42株HA—MRSA中,以SCCmecⅢ型和Ⅲa型较多,分别为10株和16株,其次为SCCmecⅡ型7株和SCCmecⅢb型6株,还有3株未定型。没有发现SCCmecⅠ型菌株。(4)MLST分型:对pvl基因阳性的CA—MRSA临床株6Saul,进行MLST分型。属于ST88。该菌株来自脓液。结论1、健康者鼻腔携带菌株中,没有发现CA—MRSA。在54株MRSA临床株中,发现12株CA—MRSA。2、应用临床药敏实验、PCR法筛检pvl基因、SCCmec分型,及MLST分型,对12株CA—MRSA进行分析。其中1株携带pvl基因,为SCCmecⅣ型,MLST型别为ST88;另外11株pvl基因均阴性,除1株SCCmec分型属未定型外,均为SCCmecⅣ型。CA—MRSA的情况与国内外报道相符。本研究是天津地区首次应用遗传学方法,系统地对CA—MRSA临床株的流行情况、临床特点和基因型别进行综合研究。