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目的研究PHD2基因在前列腺癌PC3细胞血管生成拟态形成及细胞增殖、迁移、侵袭中的作用方法1.前列腺癌PC3细胞株体外培养,设计4条PHD2shRNA序列,包装后转染PC3细胞,利用Western Blot及RT-PCR检测沉默效率,选出沉默效果最好的shRNA为实验组。2.实验分为PC3组、PC3+shRNA-NC组和PC3+PHD2shRNA组,利用Western Blot法检测转染后各组PC-3细胞中PHD2及HIF-1α、EphA2蛋白表达变化情况。3.各组细胞进行体外三维培养,显微镜下观察各组PC3细胞中血管生成拟态形成数目的变化情况。4.利用MTT增殖实验、细胞划痕实验、Transwell侵袭实验,检测各组PC3细胞增殖、迁移、侵袭能力的变化情况。结果1.Western Blot及RT-PCR实验结果显示:四组shRNA质粒转染前列腺癌PC3细胞后,PC3细胞中PHD2 mRNA表达水平及蛋白表达水平均明显下降,差异具有统计学意义(P<0.01)。获得实验组PHD2shRNA,沉默效率达80%以上。2.Western Blot实验结果显示:转染48h后,较空白组及阴性对照组相比,PHD2沉默组PC3细胞中HIF-1α及EphA2蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。3.体外三维培养实验结果显示:体外三维培养48h后,与空白组及阴性对照组相比,PHD2沉默组PC3细胞中能见到较多的VM管道样结构,差异有统计学意义(P<0.05)。4.MTT增殖实验结果显示:在不同的时间节点(24h、48h、72h)进行细胞活性检测,较空白组及阴性对照组相比,PHD2沉默组PC3细胞的活性呈时间依赖性增高,差异有统计学意义(P<0.05)。5.划痕实验结果显示:观察不同时间点(24h、48h、72h)各组细胞的迁移距离,PHD2沉默组与阴性组及空白组比较发现,PHD2沉默组细胞的迁移距离在不同的时间节点均明显大于空白组及阴性组,差异具有统计学意义(P<0.05)。6.Transwell实验结果显示:空白组及阴性组相比,PHD2沉默组内进入Transwell下室的细胞数明显增多,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论沉默PHD2能增强PC3细胞增殖、迁移、侵袭及血管拟态生成的能力,其机制可能与上调HIF-1α及EphA2的表达有关。