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硫酸软骨素蛋白聚糖(CSPGs)在脊髓损伤后形成的胶质瘢痕的微环境中含量升高,它是一类重要的轴突再生抑制因子。近些年的研究表明,CSPGs对神经损伤修复的抑制作用是通过硫酸软骨素(CS)实现的。所以我们通过噬菌体展示技术筛选出了几种硫酸软骨素结合肽,并且通过酶联免疫吸附试验(ELISA)鉴定了其中一种与CS表现出最强的亲和力的结合肽TR。 在本课题中,我们主要通过轴突生长实验、CSPGs斑块实验和免疫印迹实验(Western Blot)研究了结合肽TR(实验组)和随机肽TS(对照组)在原代小鼠小脑颗粒细胞中对CSPGs的功能的作用及相关的信号通路的改变;另外用人神经母细胞瘤细胞(SK-N-SH)做了划痕实验,研究CSPGs和CS结合肽TR对神经细胞迁移的影响。实验结果显示CS结合肽TR表现出对CSPGs在轴突再生中抑制功能有拮抗拮抗作用。其中在轴突生长实验中,CSPGs浓度在0.5-5μg/mL范围内随着浓度的升高对轴突的生长有显著的抑制作用(CSPGs浓度为1.0和2.5μg/mL时,P<0.01)。CSPGs浓度为1μg/mL时,结合肽TR给药浓度50-200μg/mL时均能显著促进轴突的生长(TR浓度为100和200μg/mL时,P<0.01)。在CSPGs斑块实验中,与对照组相比,50μg/mL结合肽TR给药时,小脑颗粒细胞轴突可以穿过CSPGs(5μg/mL)形成的斑块边界。在免疫印迹实验中,我们发现CSPGs(1μg/mL)降低了L1、pERK/ERK、mTOR的表达水平,而共同给予TR结果显示可不同程度提高L1、pERK/ERK和mTOR的表达水平。划痕实验观察到:与对照组相比,CSPGs浓度为2μg/mL时能抑制SK-N-SH细胞的迁移;与CSPGs组相比,CS结合肽TR(100μg/mL)共同处理时能够促进细胞的迁移。上述研究结果表明在含有CSPGs的抑制环境中CS结合肽TR可通过增加L1表达,并通过调控Erk、mTOR信号通路来促进轴突的生长,且能改善神经细胞的生长状态,说明结合肽 TR其有应用于神经损伤修复的潜在价值。