芳香型矮牵牛筛选及再生体系建立

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矮牵牛(Petunia hybrida)为茄科(Solanaceae)碧冬茄属(Petunia),多年生草本植物,原产南美温带地区,主要栽植于中国、日本、欧美等地。矮牵牛品种繁多,丰富多彩的花色、较大的花冠和独特的香味使其成为花香、花色研究领域常见的模式植物之一。然而矮牵牛品种繁多,由于育种目标不同,各矮牵牛品种间花香性状差异较大,在当前“康养”概念的助推下,芳香型矮牵牛品种越来越受到人们的青睐,因此系统展开矮牵牛品种花香特征研究意义重大。本研究以8个系列12个品种矮牵牛为材料,利用嗅觉对其香味浓淡程度进行分类,同时采用顶空-固相微萃取(HS-SPME)与气相色谱-质谱联用(GC-MS)技术,鉴定及定量分析了不同品种的顶空挥发成分,并在此基础上进行了主成分分析和聚类分析,结合分析结果对芳香品种‘地毯蓝色’进行了再生体系建立,为矮牵牛培育、芳香品种资源的保存及芳香品种推广等工作提供了技术支持。矮牵牛花挥发成分多种多样,不同品种矮牵牛花冠性状与挥发性成分均存在显著差异。依据矮牵牛花香浓淡程度将12个品种分为芳香型、清香型、淡香型三类,12个矮牵牛品种中共检测出66种挥发物,主要包括醚类、醇类、酯类、萜烯类、烷烃类等10大类。其中‘地毯’系列主要挥发物为酯类(苯甲酸甲酯);‘海市蜃楼’系列关键挥发物为醚类(二甲醚、正己醚)、醇类(乙醇)和烯类((S)-(-)-柠檬烯);‘轻浪’系列关键挥发物为烯萜类(三环萜、β-蒎烯)和酯类(2-甲基丁酸甲酯、苯甲酸甲酯);其余4个品种关键挥发成分别为乙醇、三环萜、β-蒎烯、2-甲基丁酸甲酯、苯甲酸甲酯等,聚类分析表明挥发成分相近的品种其遗传关系较为接近。在供试的12个矮牵牛品种中,芳香型品种‘地毯蓝色’含有的挥发成分最多,达18种,醇类、酯类、萜类、烯类、醛类、芳香烃类、烷烃类均有包含。其中,芳香型矮牵牛品种的特征芳香成分苯甲酸甲酯在‘地毯蓝色’中的相对含量为97.49%,在所有品种中最高;另外,‘地毯蓝色’这一品种还能特异挥发乙酸苯甲酯(梅花特征香气成分),相对挥发量为0.65%。这一发现可为梅花挥发物合成、转运及释放机制提供研究基础,同时为矮牵牛的香花育种提供理论依据。因此,本文选择芳香型矮牵牛品种‘地毯蓝色’的幼嫩叶片为外植体对其进行再生体系建立。再生体系研究表明,先用75%酒精(C2H5OH)漂洗30秒,再用5%次氯酸钠(Na Cl O)消毒8 min,表面消毒效果最好,无菌外植体获得率可达93.75%;愈伤组织诱导与不定芽分化最适培养基为:MS+1.5 mg·L-16-苄氨基嘌呤(6-BA)+0.3 mg·L-1萘乙酸(NAA),诱导率可达100%,且能分化出健壮的不定芽;最适不定芽增殖培养基为MS+0.5 mg·L-1 6-BA+0.4 mg·L-1 NAA,增殖系数可达14.67倍;最适生根培养基为1/2MS+0.05 mg·L-1吲哚丁酸(IBA),生根率为100%,平均根数达37.67条,平均根长达2.61 cm,生根指数最高,达9.82,单条不定根最长可达5.22 cm;炼苗移栽后,成活率高达92.50%。
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