条斑紫菜TPS基因转化水稻的研究

来源 :青岛农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:bababa666
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
本研究目的是用条斑紫菜6-磷酸海藻糖合成酶基因(PyTPS)转化水稻获得转基因植株,为筛选出耐盐、抗旱的转基因水稻植株与品系奠定基础,主要研究结果如下:   1、建立了水稻成熟胚愈伤组织为外植体的再生体系。   日本晴、台北309、中花11、旱稻297四个品种的种子在N6+2,4-D2mg/L+CH0.3g/L+脯氨酸2.878g/L培养基上可诱导出淡黄色颗粒状、结构致密的愈伤,愈伤在RGH6培养基上可分化出不定芽,分化率分别为78.8%,80.0%,70.6%和84.0%。在1/2MS+MET2mg/L培养基上可顺利生根,形成完整的植株。   2、建立了农杆菌介导的水稻遗传转化体系,获得了抗卡那霉素的再生植株。   在含卡那霉素、利福平与氯霉素三种抗生素的培养基上对农杆菌株AGL1(pCAMBIA2300-PyTPS)进行了严格的活化培养。利用针对目的基因的DNA引物(R1和3KpnI)、针对载体与目的基因的引物(35Sfor和P4)及针对NPTⅡ基因的引物(NPTⅡ-F和NPTⅡ-R)对PyTPS基因的植物表达载体进行了PCR鉴定,并分别扩增出了1300bp、500bp与600bp的特异性片段.   用100μmol/L乙酰丁香酮制备农杆菌悬浮液,成熟胚诱导的愈伤继代培养一周后,经过农杆菌悬浮液侵染20min,28℃黑暗中共培养3d,然后将愈伤组织接在筛选培养基上(N6+2,4-D2mg/L+麦芽糖20mmg/L+甘露醇36.43mg/L+Cef400mg/L+Km100mg/L+琼脂粉8.0g/LpH5.8),28℃暗培养20~25d后,进行第一次筛选。进行第二次筛选的培养基提高了卡那霉素浓度(N6+2,4-D2mg/L+麦芽糖20mmg/L+甘露醇36.43mg/L+Cef400mg/L+Km150mmg/L+琼脂粉8.0g/LpH5.8)。大部分愈伤组织在筛选10d左右开始褐化,然后在褐化组织的边缘选取重新长出乳白色愈伤抗性组织。   经2~3轮筛选后长出的抗性愈伤组织中挑选乳黄色致密性好的抗性愈伤组织转至28℃,16h/d光照条件下的分化培养基上,一般经过20d,有绿点出现,30~40d后进一步分化出小芽。当小芽长至约1cm时,移到生根培养基上,形成完整的植株。   3、建立了PCR扩增与鉴定体系,筛选出了水稻转基因植株。   用CTAB法提取水稻抗性植株与非转基因植株的DNA,并用作模板,用持家基因的引物PT1、PT2进行PCR扩增,均获得了350bp的目的条带,也就是说建立了水稻叶片DNA为模板的PCR扩增与鉴定体系。   以抗性植株的DNA为模板,用针对载体的引物(35Sfor)与针对目的基因PyTPS基因的引物(P4)进行PCR,扩增出了500bp的特异性片段,即获得了日本晴的转基因植株。
其他文献
加氢装置中的新氢压缩机、循环氢压缩机是该装置的核心设备,对装置的生产平稳及操作周期有重要作用.根据工艺操作要求,结合工程设计经验,参照API标准对加氢装置的压缩机的配
对于高中信息技术教学来说,合理设置情境有利于培养学生对信息技术的好奇心和学习热情,从而提高信息技术课堂的教学效率.结合高中信息技术课程特点探究其教学情境的创设方法,
本文提出用单相甲醇己烷的混合溶液浸取棉仁的设想.为验证此想法的可行性,作了以下的研究工作:1.进行串级实验模拟验证,通过对不同工艺参数的比较得到结论如下:1)浸取时间的
在自行设计、建立的连续式超临界水氧化反应实验装置上对苯酚、苯胺、硝基苯在超临界水中的氧化反应进行了研究。
在常规钙钛矿太阳能电池(Perovskite solar cells, PSCs)中,通常使用有机P型半导体提取空穴,并使用蒸镀法制备的Au或Ag薄膜电极进行收集。目前,PSCs普遍使用的有机空穴传输层spiro-MeOTAD不仅价格昂贵而且稳定性较差,Au或Ag作为PSCs的背电极需要高真空设备进行制备,不适合商业化大规模生产。因此,选择优异的背电极材料不仅可以保证电池的性能,还可以提高电池稳定
随着我国原油进口量的不断增加和炼油企业竞争的日趋激烈,胜利炼油厂原油加工总量以及进口原油所占的比例逐年增加,进口原油资源的优化是胜利炼油厂生存与发展的重要环节.对
裸露冠脉支架的术后再狭窄问题,制约了介入心脏病学的发展,而支架表面涂层很好地解决了这一问题,被称为第二代血管支架,受到人们的亲睐,由此也出现了许多不同的支架表面涂层,产生了
藻蓝胆素(PCB)是某些藻类所特有的天然色素,由于其特殊的光谱学性质,被作为一种优良的荧光探针分子广泛应用于免疫疾病诊断和光动力治疗等领域。同时,由于其还具有消炎、抗氧化、清除自由基等功能,因此,在食品、化妆品及医药保健品领域同样具有显著的潜在应用价值。然而,目前,制取藻蓝胆素的主要方法是从天然藻类中提取,该方法制备工艺复杂,生产成本高,因此市场上高纯度的藻蓝胆素价格十分昂贵,严重限制了其大规模产
学位
Silicalite-1分子筛膜,作为无机膜的一种,具有很好的耐热性和耐酸性,无穷大的硅铝比赋予了其良好的疏水性,使得其在水中脱有机物有很好的应用前景,尤其是在原位法脱除发酵液中低浓
蓝莓(Vaccinium corymbosum L.)为杜鹃花科(Ericaceae)越橘属(Vacciniumspp.)的多年生灌木果树。因其果实富含花青素、黄酮等活性物质而被称为“五大健康水果”之一。近年来南