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结直肠癌(CRC)是人类最常见的癌症类型之一,其具有较高的发病率和病死率。尽管临床药物和治疗手段的更新改善了临床结果,但转移性结直肠癌在大多数情况下仍然是一种不治之症,因此寻找新的药物进行靶向治疗、辅助化疗或者找寻新的生物标记物用于早期诊断、患者分层以预测预后是必要的。去氧地胆草素(Deoxyelephantopin,DPT)来自于菊科植物地胆草。它能够减轻炎症和抑制多种肿瘤的发生发展。例如,去氧地胆草素抑制宫颈癌Si HA细胞的生长并诱导其凋亡;去氧地胆草素通过氧化应激、抑制NF-κB和线粒体功能障碍诱导肝癌细胞凋亡;去氧地胆草素可通过ROS介导的细胞外活性和蛋白功能抑制三阴性乳腺癌细胞的活性;去氧地胆草素对小鼠乳腺癌TS/A细胞的肺转移也有抑制作用等。然而,去氧地胆草素对结直肠癌的具体调控机制还不清楚。因此,我们通过MTT、Edu、流式细胞周期和细胞凋亡检测、Western-blot、Soft-agar等实验方法来检测去氧地胆草素在结直肠癌中的作用。主要的实验结果如下:1.去氧地胆草素抑制结直肠癌细胞的细胞增殖和诱导其细胞凋亡MTT实验结果表明,四种结直肠癌细胞系的生长抑制率会随去氧地胆草素浓度的增加而升高。此外,去氧地胆草素对结直肠癌细胞的生长抑制也具有时间效应,随着时间的延长,细胞的生长抑制率增加。并且,Edu的实验结果表明去氧地胆草素能抑制结直肠癌细胞的DNA复制能力。Soft-agar结果显示,相比于对照组,随着去氧地胆草素浓度的增加,结直肠癌细胞的克隆数目减少,大小明显变小,表明去氧地胆草素抑制结直肠癌细胞的体外克隆能力。此外,免疫缺陷小鼠的个体实验表明,去地胆草素治疗的小鼠肿瘤生长比对照组慢,体重低于对照组,能够显著抑制小鼠皮下肿瘤的生长,免疫组化检测结果也明去氧地胆草素治疗组瘤子的Ki-67增值信号明显少于对照组。由此可见,去地胆草素具有明显的抗癌活性。由于细胞增殖与细胞周期进程的密切关系,细胞流式的周期检测和Western-blot实验均表明去氧地胆草素将结直肠癌细胞阻滞在G2/M期。随后,我们利用透射电镜观察到去氧地胆草素处理的结直肠癌细胞中有明显的凋亡小体,细胞流式的凋亡检测、Western-blot实验也表明去氧地胆草素浓度依赖性和时间依赖性地诱导结直肠癌细胞的凋亡。此外,Soft-agar和小鼠体内成瘤实验结果也证实去氧地胆草素可明显抑制结直肠癌细胞的体内外的成瘤能力。2.高表达Bcl2影响结直肠癌细胞增殖和凋亡去氧地胆草素诱导结直肠癌凋亡的机制探究中,我们发现去氧地胆草素明显下调抗凋亡因子Bcl2的m RNA水平和蛋白水平。MTT、Edu等实验表明Bcl2的过表达可部分恢复去氧地胆草素抑制的结直肠癌细胞增殖;细胞流式、Western blot检测发现Bcl2的过表达可部分挽救去氧地胆草素诱导结直肠癌细胞的凋亡;之后,将Bcl2的抑制剂HA14-1与去氧地胆草素联合处理结直肠癌细胞,我们发现联合治疗组的细胞增殖能力更低,而凋亡水平高于单独处理的去氧地胆草素组,并且体内实验也表明联合HA14-1比单独的药物治疗能更好的抑制肿瘤的生长。3.去氧地胆草素增强5-氟尿嘧啶(5FU)的体外化疗敏感性MTT实验表明去氧地胆草素能够增强5氟尿嘧啶对HCT116和LS174T细胞增殖的抑制能力。并且,通过Western-blot实验发现去氧地胆草素联合5氟尿嘧啶处理的HCT116和LS174T细胞的C-PARP和C-caspase3蛋白表达水平明显高于单独的去氧地胆草素处理组或5氟尿嘧啶处理组。我们的实验结果表明去氧地胆草素能够增强5氟尿嘧啶对部分结直肠癌的化学治疗敏感性,为结直肠癌的临床治疗提供了更广泛的选择。