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目的:探究Hsa-miR-16能否靶向结合WWP1 mRNA并调控其在胃癌细胞中的蛋白表达,以及其对胃癌细胞增殖的影响。方法:1.利用生物信息学方法,预测miR-16的靶基因,重点关注是否可与WWP1 mRNA 3’UTR靶向结合,对miR-16进行GO分析和KEGG分析。2.用lip2000将miR-16 mimic、miR-16 inhibit转染入胃癌MGC-803细胞,提取其总RNA,进行实时荧光定量PCR,验证转染情况,并验证WWP1 mRNA表达水平有无变化。3.用Western blot从蛋白水平验证过表达或抑制miR-16后,WWP1蛋白表达是否有差异。4.构建双荧光素酶报告系统表达载体,转染293T细胞,通过荧光素酶相对活性对miR-16与WWP1的靶向关系量化评估。5.CCK8实验从细胞水平探索miR-16和沉默靶基因WWP1对胃癌细胞MGC-803增殖的影响。结果:1.多数据库预测miR-16与WWP1 mRNA 3’UTR存在靶向结合位点,GO分析和KEGG分析证实miR-16参与调节肿瘤发展。2.实时荧光定量PCR结果显示,在人低分化胃癌MGC803细胞中转染miR-16 mimic后,miR-16表达量较对照组升高(p<0.01),而在转染miR-16 inhibitor后,miR-16表达量较对照组降低(p<0.001),证明转染有效。而在WWP1 mRNA水平上,相比于对照组miR-16mimic组和miR-16 inhibitor组WWP1 mRNA水平未见明显改变。3.Western blot实验表明与对照组相比miR-16 mimic组WWP1蛋白表达量下降(p<0.01),而miR-16 inhibitor组WWP1蛋白表达量增加(p<0.05),差异均具有统计学意义。4.双荧光素酶报告系统结果表明,野生型WWP1报告质粒与miR-16或者miR-NC共转染后,miR-16组相对荧光值为0.45±0.032,显著低于miR-NC转染组,差异具有统计学意义(p<0.0001),表明miR-16可与WWP1 mRNA 3’UTR靶向结合。5.CCK8实验结果表明,转染miR-16 inhibitor可使人低分化胃癌细胞MGC-803增殖能力增强,而miR-16 inhibitor与WWP1的siRNA共转染后,可以消除这种增殖能力的增强。结论:综合以上结果表明miR-16可以靶向结合WWP1 mRNA 3’UTR进而调节人胃癌MGC-803细胞中WWP1蛋白的表达量。抑制人胃癌MGC-803细胞中miR-16的水平后,人胃癌MGC-803细胞增殖能力增强。