目前寻找肝癌细胞特异性或肝癌表面抗原特异性抗体己为众多学者关注。而噬菌体抗体库是筛选特异性抗体的有利工具,CD147分子是癌细胞表面高表达的膜蛋白。 本实验目的即构建猴源肝癌Fab噬菌体抗体库;构建CD147胞外功能区原核表达质粒,并进行原核表达及纯化;以原核表达的CD147胞外功能区蛋白为靶标对抗体库进行初步筛选,得到与其特异性结合的噬菌体抗体。 通过以人肝癌细胞SMMC—7721免疫恒河猴,血液淋巴细胞中提取总RNA,逆转录后PCR扩增出重链Fd和轻链κ。依次将PCR产物插入载体pComb3的相应部位,并依次电转化大肠杆菌XLI-blue,构建出猴源肝癌Fab噬菌体抗体库,并对抗体库进行相应鉴定;PCR扩增CD147分子胞外功能区基因,并克隆于原核表达载体pET-22b（+）,转化大肠杆菌BL21（DE3）并诱导表达CD147分子胞外功能区蛋白,对表达蛋白进行纯化、鉴定:以CD147分子胞外功能区蛋白为靶标对猴源肝癌Fab噬菌体抗体库进行三轮淘选,ELISA挑选与靶标特异性结合的克隆并对其进行分析鉴定。 得到结果如下:构建了库容为2.7×10⁶的猴源肝癌Fab噬菌体抗体库,轻链、重链重组率分别为60%和100%,滴度为2×10¹²;表达并鉴定了CD147胞外区蛋白;以CD147胞外区蛋白为靶标,对抗体库进行3轮淘选,得到了126倍富集,经ELISA鉴定,得到一株与靶标特异性结合的单克隆噬菌体抗体,并对其序列进行了鉴定。为后续工作奠定了良好的基础。