抑制差减杂交法(SSH)分离水稻幼穗发育早期特异表达的基因

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运用SSH技术,以水稻茎尖分生组织(SAM)为对照群体(Driver,D),幼穗分生组织(第一次枝梗原基和第二次枝梗原基,Pb/Sb)为目标群体(Tester,T),分别提取两种组织的mRNA,反转录成cDNA,进行差减杂交.以经过SAM cDNA差减的Pb/Sb cDNA群体构建了一个差减文库,含500个重组子.通过差示筛选鉴定了40在Pb/Bb中特异表达或表达增强的候选克隆.Northern杂交验证,大部分克隆为低丰度转录本,至少40%的候选克隆代表了在Pb/Sb中特异表达或表达增强的基因.对40个cDNA克隆单向测序,搜索GenBank中同源序列进行同源性比较.
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