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目的：检测CCND1和p21基因多个SNP位点在东北地区汉族女性中的基因型分布,探讨CCND1和p21基因多态性与东北地区汉族人群宫颈癌发病风险的相关性,探讨p21基因单体型分布对东北地区汉族女性宫颈癌发病风险的影响及两种相关基因的联合影响。对遗传易感性导致的致癌风险做初步的机制研究。
方法：应用PCR-RFLP及测序方法,对东北地区汉族宫颈癌患者(n=328)和正常女性(n=411)的CCND1基因rs9344位点的基因型分布进行检测;另对东北地区汉族宫颈癌患者(n=339)和正常女性(n=422)的p21基因rs762623,rs2395655,rs1801270,rs3176352和rs1059234位点的基因型分布进行检测。通过病例对照研究,了解CCND1基因rs9344位点;p21基因rs762623,rs2395655,rs1801270,rs3176352和rs1059234位点多态性与宫颈癌发病风险的关系。同时通过PHASE软件对p21基因各单体型在东北地区汉族女性中的分布进行分析,了解p21基因不同单体型对东北地区汉族女性宫颈癌发病风险的影响。同时对CCND1基因与p21基因进行联合分析,了解两个相关基因共同作用下对东北地区汉族女性宫颈癌发病风险的影响。通过real-time PCR、real-time RT-PCR、免疫组化和Western Blot方法对27例正常宫颈组织和81例宫颈癌组织中CCND1基因的DNA、RNA和蛋白水平变化情况进行检测。了解相关位点可能的致癌机制。
结果：
1.CCND1基因rs9344位点AA基因型降低宫颈癌发病风险(odds ratio[OR]=0.574;95％ confidence interval[CI]=0.373-0.883;P=0.012)。CCND1基因mRNA的两种转录本,转录本a和b,均可以由A或G等位基因产生。转录本b在宫颈癌组中明显下降(P=0.004),尤其是低分化组(P=0.004)和正常组中的G等位基因组(P=0.001)。在免疫组化分析中,cyclin D1,D1a and D1b与宫颈癌的发病风险无关(P=0.808,0.445 and0.095)。但是Western Blot检测提示cyclin D1b的表达在宫颈癌组中明显降低(P=0.039)。
2.p21基因rs1801270位点A等位基因对宫颈癌患病风险有保护性价值(OR=0.736,95％CI:0.601-0.902)。P21基因rs1801270位点的AA基因型降低携带人群对宫颈癌的易感性(OR=0.389,95％CI:0.196-0.771)。P21基因单体型GGAGT在宫颈癌病例组中(13.08％,95％CI:12.98-14.62％)比对照组中(18.16％,95％CI:17.3-19.02％)明显降低;单体型GACGC在宫颈癌组中(8.51％,95％CI:7.97-9.05％)相对于对照组升高(5.77％,95％CI:5.32-6.22％)。P21基因AGT单体型的纯合子和杂合子相对于不携带AGT单体型的人群存在保护价值(OR=0.489,95％ CI:0.248.0.963,P=0.039和OR=0.539,95％CI:0.337-0.860,P=0.010)。
3.p21基因rs1801270位点AA基因型和CCND1基因的rs9344位点AA基因型的携带者患宫颈癌的风险明显降低(OR=0.327,95％CI:0.135-0.792,P=0.013);携带p21基因AGT纯合子与CCND1基因rs9344位点AA基因型的人群宫颈癌的发病风险明显降低(OR=0.391,95％CI:0.175-0.873,P=0.022)；并且p21基因AGT单体型杂合子与CCND1基因rs9344位点AA基因型的携带者患宫颈癌的风险降低(OR=0.314,95％CI:0.177-0.555,P=0.001或OR=0.373,95％CI:0.183-0.759,P=0.007)；携带CCND1基因rs9344位点AA基因型同时未携带p21基因CGC单体型的人群患宫颈癌的风险明显降低(OR=0.591,95％CI:0.395-0.884,P=0.011或OR=0.512,95％CI:0.313-0.837,P=0.008)；携带CCND1基因rs9344位点AA基因型同时未携带p21基因CCC单体型的人群患宫颈癌的风险明显降低(OR=0.502,95％CI:0.296.0.852,P=0.011或OR=0.499,95％ CI:0.266-0.937,P=0.031)。
结论：
1.CCND1基因rs9344位点多态性影响汉族女性对宫颈癌的易感性,并且G等位基因可能由于cyclin D1b的下降导致其对宫颈癌的易感性增加。而A等位基因可能通过cyclin D1b对HPV致癌作用的抑制具有保护性价值。
2.p21基因rs1801270位点的A等位基因是宫颈癌的保护因素。同时,p21基因rs1059234位点的杂合基因型同样对宫颈癌具有保护价值。这种保护价值还体现在了单体型水平。
3.在CCND1基因和p21基因多态性的联合分析中,我们同样发现了rs9344位点和rS1801270位点AA基因型对宫颈癌的保护价值,这种保护价值也同样体现在单体型有关的联合分析中。