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学习和记忆障碍被广泛认为是许多神经退行性疾病的主要临床综合症。失眠是导致现代社会部分与记忆缺陷相关的神经退行性疾病的主要原因之一。因此,开发功能性食品以减轻由失眠所导致的记忆缺陷显得尤为重要。研究报道核桃肽在多种动物记忆损伤模型中显示出明显的神经保护作用,然而未见关于核桃肽对睡眠剥夺(SD)诱导的大鼠学习和记忆障碍具有改善作用的研究报道。此外,大量研究主要集中在核桃蛋白水解物(WPH)的神经保护作用方面。较少涉及核桃蛋白水解物(WPH)中神经保护肽的结构特征。因此,本论文以核桃肽为研究对象,探明核桃肽对大鼠SD诱导的记忆缺陷具有改善作用的基础之上,进一步鉴定和表征核桃肽中的神经保护肽,并系统研究其对谷氨酸损伤PC12细胞的保护作用,揭示核桃神经保护肽的作用机制。
本论文研究了核桃肽对睡眠剥夺导致的大鼠记忆障碍的改善作用:结果显示,核桃蛋白酶解物低分子肽段(WPHL,MW<3kDa)较核桃蛋白酶解物(WPH)在定位航行和空间探索行为学试验中对模型大鼠具有更好的改善效果。使用WPH和WPHL干预可使得SD大鼠脑中抗氧化防御酶(CAT,GSH-px和SOD)活性和GSH/GSSG比例降低,以及MDA含量的升高趋于正常。以上结果表明核桃肽可以通过减轻氧化应激来减弱SD诱导的记忆缺陷,且WPHL表现出比WPH更强的神经保护作用。
随后,对WPHL肽段进行分离鉴定,并化学合成目标肽进行谷氨酸损伤PC12细胞的体外神经保护作用研究:结果表明,采用SephadexG-15凝胶过滤色谱可将WPHL分成的6个组分(G1-G6),其中G4和G6对谷氨酸处理的PC12细胞存活率的提升作用最强。利用UPLC-ESI-Q-TOF-MS/MS从G4和G6中鉴定出18条肽,其中GGW、VYY和LLPF可显著提高谷氨酸损伤PC12细胞的存活率,表现出较强的神经保护作用。
最后,采用谷氨酸诱导PC12细胞氧化损伤模型探讨GGW、VYY和LLPF对神经细胞的保护作用机制:结果表明,GGW、VYY和LLPF可以保护PC12细胞免受谷氨酸诱导的细胞凋亡,并减少PC12细胞中ROS的产生。其中GGW和VYY发挥保护作用的潜在机制可能与它们强烈的自由基清除活性,以及减少PC12细胞中SOD和GSH-px消耗的能力有关。值得注意的是,几乎不具有自由基清除活性的LLPF也表现出显著的神经保护作用,可能与其对Ca2+内流和MMP损失的强烈抑制作用有关。此外,以上三条肽均可正向调控凋亡相关蛋白(Bax和Bcl-2)的表达。因此,核桃肽可作为预防记忆缺陷相关的神经退行性疾病的潜在营养保健品。
本论文研究了核桃肽对睡眠剥夺导致的大鼠记忆障碍的改善作用:结果显示,核桃蛋白酶解物低分子肽段(WPHL,MW<3kDa)较核桃蛋白酶解物(WPH)在定位航行和空间探索行为学试验中对模型大鼠具有更好的改善效果。使用WPH和WPHL干预可使得SD大鼠脑中抗氧化防御酶(CAT,GSH-px和SOD)活性和GSH/GSSG比例降低,以及MDA含量的升高趋于正常。以上结果表明核桃肽可以通过减轻氧化应激来减弱SD诱导的记忆缺陷,且WPHL表现出比WPH更强的神经保护作用。
随后,对WPHL肽段进行分离鉴定,并化学合成目标肽进行谷氨酸损伤PC12细胞的体外神经保护作用研究:结果表明,采用SephadexG-15凝胶过滤色谱可将WPHL分成的6个组分(G1-G6),其中G4和G6对谷氨酸处理的PC12细胞存活率的提升作用最强。利用UPLC-ESI-Q-TOF-MS/MS从G4和G6中鉴定出18条肽,其中GGW、VYY和LLPF可显著提高谷氨酸损伤PC12细胞的存活率,表现出较强的神经保护作用。
最后,采用谷氨酸诱导PC12细胞氧化损伤模型探讨GGW、VYY和LLPF对神经细胞的保护作用机制:结果表明,GGW、VYY和LLPF可以保护PC12细胞免受谷氨酸诱导的细胞凋亡,并减少PC12细胞中ROS的产生。其中GGW和VYY发挥保护作用的潜在机制可能与它们强烈的自由基清除活性,以及减少PC12细胞中SOD和GSH-px消耗的能力有关。值得注意的是,几乎不具有自由基清除活性的LLPF也表现出显著的神经保护作用,可能与其对Ca2+内流和MMP损失的强烈抑制作用有关。此外,以上三条肽均可正向调控凋亡相关蛋白(Bax和Bcl-2)的表达。因此,核桃肽可作为预防记忆缺陷相关的神经退行性疾病的潜在营养保健品。