多西紫杉醇对人甲状腺乳头状癌细胞放射增敏作用及其机制研究

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目的:观察多西紫杉醇对人甲状腺乳头状癌TPC-1细胞增殖抑制、细胞凋亡、细胞周期分布及其相关蛋白表达的影响,来初步探讨多西紫杉醇对人甲状腺乳头状癌细胞放射增敏的作用及其机制,为临床精准治疗提供理论依据。  方法:  1.不同浓度(5×10-3、5×10-2、5×10-1、5、10、20、50、100ug/ml)的多西紫杉醇作用于体外培养的人甲状腺乳头状癌TPC-1细胞,通过CCK-8法测定24h、48h、72h后TPC-1细胞的增殖抑制情况,并且绘制细胞的生长抑制曲线。  2.采用克隆形成实验检测0.005ug/ml多西紫杉醇对甲状腺乳头状癌TPC-1细胞放射增敏作用,采用单击多靶数学模型拟合细胞存活曲线,计算相关放射学参数。  3.将甲状腺乳头状癌TPC-1细胞分别设为空白对照组、单纯照射组(8Gy照射)、单纯药物组(0.05ug/ml多西紫杉醇)、药物加照射组(0.05ug/ml多西紫杉醇加8Gy照射),分别给予上述不同处理后通过流式细胞仪测定24h、48h、72h各组细胞的凋亡率情况及处理24h后各组细胞的周期分布情况。  4.采用Western blotting技术检测不同处理后各组细胞Bax、Bcl-2蛋白表达情况。  结果:  1.CCK-8检测结果:不同浓度多西紫杉醇(5×10-3、5×10-2、5×10-1、5、10、20、50、100ug/ml)作用甲状腺乳头状癌细胞后,与对照组比较,各处理组的吸光度A值均显著下降,差异具有统计学意义,且存在明显的剂量和时间依赖性,半数抑制浓度为6.06 ug/ml(24h),1.39 ug/ml(48h),0.09ug/ml(72h)。  2.克隆形成实验结果:药物+照射组的SF2、D0、Dq较单纯照射组均有所下降,多西紫杉醇的放射增敏比(SER)为1.53。  3.Annexin V-FITC/PI染色法检测细胞凋亡率:三个处理组较对照组相比,TPC-1细胞的凋亡指数在处理24h、48h、72h后均明显增加,差异具有统计学意义;且不同时间段药物加照射组的凋亡率也明显高于单纯照射组。  4.流式细胞术检测细胞周期结果:空白对照组的甲状腺乳头状癌细胞大部分处于G1期,其次为S期,G2/M期所占比例最少。给予TPC-1细胞单纯照射、单纯药物、药物加照射处理24h后,与空白对照组相比,各周期发生变化,多西紫杉醇使TPC-1细胞发生G2/M期阻滞,与单纯照射组相比,药物+照射组显著增加G2/M期细胞阻滞。  5 Western blotting检测不同处理组作用于甲状腺乳头状癌TPC-1细胞24h后,各组蛋白表达情况:单纯照射组、单纯药物组和药物加照射组Bax表达水平均高于空白对照组,且差异具有统计学意义,药物加照射组的表达量高于单纯照射组和单纯药物组;并且三个组的Bcl-2蛋白表达水平较空白对照组相比明显降低,具有统计学意义;药物加照射组低于单纯药物组和单纯照射组。与空白对照组相比,各组Bcl-2/Bax比值均明显下降,统计学具有显著性差异,药物加照射组低于单纯药物组和单纯照射组。  结论:  1.多西紫杉醇对甲状腺乳头状癌TPC-1细胞具有明显的增殖抑制作用,且呈时间-剂量依赖性。  2.多西紫杉醇能明显增加甲状腺乳头状癌TPC-1细胞的放射敏感性。  3.多西紫杉醇诱导细胞凋亡、改变细胞周期时相分布、可能通过调节Bax、Bcl-2等相关蛋白的表达来影响细胞放射敏感性。
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