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目的:腺病毒(Adenovirus,AdV)是引起呼吸道感染最常见的病原体之一。共七组65个血清型,能引起人体不同器官的多种疾病。为了解哈尔滨地区人呼吸道感染腺病毒的流行状况,建立合适的防治策略,并为人腺病毒工程疫苗的研究提供基础。 方法:本实验对收集的哈尔滨医科大学附属第二医院的2009年8月至2010年7月呼吸道感染患者的咽拭子标本(确诊的呼吸道疾病种类有肺炎、支气管炎、哮喘、COPD、支气管扩张、肺心病、肺占位及肺癌等)中腺病毒检测阳性的标本,进行了病毒的分离、鉴定以及分子进化树分析。 采用直接免疫荧光法(DIF)检测临床采集的呼吸道疾病患者痰标本中的呼吸道病毒。腺病毒阳性的痰标本经处理后接种肺癌A549细胞进行病毒培养,用空斑实验进行毒株的分离和纯化。腺病素六邻体核酸序列是腺病毒型别间相对保守的区域,所以选择通过扩增全部型别六邻体保守区域,初步鉴定分离病毒的型别。下载GenBank中已收录的所有型别人呼吸道腺病毒六邻体核酸序列,primerpremier5.0设计腺病毒六邻体通用特异引物。用纯化后的病毒DNA为模板采用PCR方法扩增腺病毒六邻体基因,对扩增产物进行序列测定,测序结果进行BLAST分析。为进一步判定该毒株与本地区以及临近地区流行的腺病毒毒株的亲缘关系,利用该段测序结果同若干有代表性的人腺病毒六邻体基因序列进行比对,依据比对结果用邻接法构建进化树。 结果:呼吸道感染患者痰标本中分离到两株人腺病毒毒株,测序发现两株病毒扩增的六邻体序列是相同的。取其中一株作分析,经BLAST序列比对和进化树分析,发现该腺病毒株的六邻体序列与人7型腺病毒Gomen株、广州株(GZ07、GZ08)六邻体基因最为接近,同源性均为100%。同本实验室在哈尔滨地区分离到的Harbin04B毒株比较接近,同源性为99.6%,都不包含完整的人腺病毒六邻体核酸序列编码区,且这两条序列不完全重合,在两者共有的946bp的核酸序列中,有区别的碱基有4个。在315个氨基酸残基中,有区别的残基数目是2个。 结论:从哈尔滨地区呼吸道感染患者咽拭子标本中分离到人7型腺病毒。并且,多年来,腺病毒7型变异比较微小。