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本研究综合利用各种层析方法从鲢鱼Ⅳ期卵中分离纯化了两种高分子CPIs,分别命名为gLMWCPI-a-3-17和gHMW CPI-b-2-14。在纯化过程中通过SDS-PAGE和明胶底物-SDS-反相酶谱法对其进行了监测和鉴定。通过TSK gel G2000 SWXL凝胶高效液相色谱和Jupiter 300 C4反相高效液相,进一步鉴定了它们的纯度,进而通过分析两种高分子CPIs的MALDI-TOF-TOF肽指纹图谱鉴定蛋白。此外,分析了鲢鱼卵高分子CPIs的热稳定性、pH稳定性、抑制常数Ki和抑制活性类型等理化特性和动力学常数指标。最后,通过测定Ishikawa细胞增殖、迁移、粘附、克隆形成率、细胞形态以及细胞因子VEGF-A分泌情况等指标,初步探讨了鲢鱼卵高分子CPI gHMW CPI-b-2-14对Ishikawa细胞的影响。鲢鱼卵高分子CPIs的纯化鉴定：对经匀浆、酸处理和30KDa超滤浓缩的鲢鱼卵高分子CPIs粗提液进行层析纯化,以灵敏度较高的荧光合成肽底物法检测层析后CPIs的抑制活性。取Sp Sepharose Fast Flow阳离子交换层析中抑制活性和比活均最高的峰II,进行Blue Sepharose 6 Fast Flow染料亲和层析,收集主要活性峰3经Octyl-Sepharose 4 Fast Flow疏水层析,得活性较高的活性部分a和活性部分b。活性部分a经ConA Sepharose 4B亲和层析后所得的吸附糖蛋白部分a-3,经TSK gel G2000 SWXL凝胶高效液相鉴定表明,其仅在保留时间为17.331mmin呈现蛋白峰,C4反相高效液相分析其在14.321min处存在单一峰,得到了有效的纯化,纯化了848.76倍,收率为2.13%,并将该部分命名为gLMW CPI-a-3-17。利用SDS-PAGE及TSK gel G2000 SWXL凝胶高效液相标准曲线判断其分子量为44KDa。活性部分b经ConA Sepharose 4B亲和层析后得到的不吸附的非糖基化部分b-1和吸附的糖基化部分b-2,两者再经TSK gel G2000 SWXL凝胶高效液相后分别在保留时间为13.727min、14.421 min处获得单一蛋白峰,将其命名为ungHMW CPI-b-1-14和gHMW CPI-b-2-14.进一步通过C4反相高效液相分析gHMW CPI-b-2-14在14.544min处存在单一峰。最终糖基化的gHMW CPI-b-2-14纯化了468.91倍,收率为2.07%。SDS-PAGE结合明胶底物-SDS-反相酶谱法鉴定gHMW CPI-b-2-14分子量为125KDa。通过蛋白的MALDI-TOF-TOF肽指纹图谱鉴定,表明ungHMW CPI-b-1-14与青鳉Medaka (Oryzias latipes)的一种未鉴定蛋白匹配,而gHMW CPI-b-2-14未得到鉴定。gLMWCPI-a-3-17和gHMW CPI-b-2-14都具有较宽的热稳定性和pH稳定性,在80℃分别保留90%及80%以上的残余抑制活性,且分别在pH7.0-9.0及pH8.0时最稳定,均能有效的抑制Papain、Catehpsin B和Catehpsin L,而对Trypisn和Chymotrypsin不具有抑制活性。利用Dixon-plot作图法测得gLMW CPI-a-3-17和gHMW CPI-b-2-14都属于竞争性抑制剂,抑制常数Ki分别为0.0292nM和0.0116nM。鲢鱼卵gHMW CPI-b-2-14对Ishikawa细胞的影响：对Ishikawa细胞的影响的初探研究表明,鲢鱼卵gHMW CPI-b-2-14能有效的抑制Ishikawa细胞的增殖,且呈现剂量和时间相关性,即随着gHMW CPI-b-2-14剂量的增加和培养时间的延长,抑制作用越大。高剂量组(5-40μg/mL)的gHMW CPI-b-2-14在培养一周后对单克隆的Ishikawa细胞具有致死效应,而低剂量组(0.5-2.5μg/mL)随着gHMW CPI-b-2-14剂量的增加,Ishikawa细胞克隆形成能力下降,单个克隆内的细胞数量减少,与对照组相比,各剂量组差异极显著(p<0.01)。划痕实验结果表明,Ishikawa细胞的迁移能力也与gHMW CPI-b-2-14呈现剂量和时间相关性,培养72h后对照组划痕处呈现愈合状态,而高剂量组(5-40μg/mL)与0h时划痕宽度差异不显著(p>0.05)。且随着gHMW CPI-b-2-14剂量的增加,对Ishikawa细胞粘附能力抑制效果越显著。Hoechest 33342染色结果表明高剂量组(5-40μg/mL)处理后的Ishikawa细胞细胞核荧光染色强度显著增强,呈现亮蓝色,并伴随核固缩和核碎裂现象,而低剂量组(0.5-2.5μg/mL)与对照组差异不显著(p>0.05)。ELISA检测结果表明gHMW CPI-b-2-14能有效的抑制VEGF-A的分泌,在培养至48h时分泌量达到高峰,且1.5μg/mL剂量组对VEGF-A分泌的抑制作用最显著,与对照组差异极显著(p<0.01)。