【摘 要】
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目的:鼻咽癌是指发生在鼻咽喉顶部和侧壁部的恶性肿瘤,湖南省为高发地区之一,鼻咽癌发生发展的分子机制研究一直备受研究人员关注。目前,紫杉醇为晚期鼻咽癌的一线治疗药物,其与微管蛋白不可逆结合后导致细胞周期发生阻滞从而引起细胞死亡。我们在探索紫杉醇联合蛋白酶体抑制剂的化疗方案时发现低浓度的蛋白酶体抑制剂可显著减少紫杉醇引起的鼻咽癌细胞死亡。本研究将通过以下方法阐明蛋白酶体抑制剂降低紫杉醇对鼻咽癌细胞杀伤
【基金项目】
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湖南省研究生科研创新项目CX20200983； 湖南省自然科学基金面上项目2020JJ4636； 国家自然科学基金青年科学基金项目（81802952）；
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目的:鼻咽癌是指发生在鼻咽喉顶部和侧壁部的恶性肿瘤,湖南省为高发地区之一,鼻咽癌发生发展的分子机制研究一直备受研究人员关注。目前,紫杉醇为晚期鼻咽癌的一线治疗药物,其与微管蛋白不可逆结合后导致细胞周期发生阻滞从而引起细胞死亡。我们在探索紫杉醇联合蛋白酶体抑制剂的化疗方案时发现低浓度的蛋白酶体抑制剂可显著减少紫杉醇引起的鼻咽癌细胞死亡。本研究将通过以下方法阐明蛋白酶体抑制剂降低紫杉醇对鼻咽癌细胞杀伤作用的相关分子机制。方法:1.细胞增殖毒性实验检测蛋白酶体抑制剂与紫杉醇联合处理鼻咽癌细胞后对细胞增殖的影响。2.显微镜观察蛋白酶体抑制剂与紫杉醇联合处理鼻咽癌细胞后细胞的形态学变化。3.流式细胞术检测蛋白酶体抑制剂与紫杉醇联合处理鼻咽癌细胞后细胞周期以及细胞凋亡的情况。4.蛋白免疫印迹实验检测蛋白酶体抑制剂与紫杉醇联合处理鼻咽癌细胞后周期及凋亡相关蛋白的表达水平变化。结果:CCK-8实验检测细胞增殖情况发现400n M浓度的紫杉醇可有效抑制鼻咽癌细胞增殖并且诱导细胞死亡,而加入蛋白酶体抑制剂（PS341 30n M或MG132 700n M）可显著减弱紫杉醇对肿瘤细胞增殖的抑制作用;同时显微镜下观察发现400n M的紫杉醇能够诱导大部分鼻咽癌细胞变圆,但蛋白酶体抑制剂的加入显著减少了形变细胞的数量;流式细胞术的检测结果显示蛋白酶体抑制剂的加入同样显著减少了紫杉醇诱导的鼻咽癌细胞周期阻滞以及细胞死亡数量;蛋白免疫印迹实验检测发现蛋白酶体抑制剂的加入改变了周期调控蛋白的表达情况且CDK1和Cyclin B1发生累积,依赖CDK1蛋白激活的凋亡信号轴减弱;且使用CDK1抑制剂RO3306抑制CDK1功能同样削弱了紫杉醇对鼻咽癌细胞的抑制能力。结论:1.蛋白酶体抑制剂可以显著减少紫杉醇对鼻咽癌细胞的抑制能力。2.抑制CDK1的功能可削弱紫杉醇诱导的鼻咽癌细胞死亡。
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