【摘 要】
：
假单胞菌在自然界中分布广泛,是常见的一类环境微生物,其中的致病性菌株在细菌致病机理方面均有重要的研究价值。东湖假单胞菌（Pseudomonas donghuensis）HYS菌株是本实验室从东湖水域分离鉴定命名的,前期研究发现其对秀丽隐杆线虫的慢性致死作用比铜绿假单胞菌PAO1和PA14菌株更为强烈,提示了该菌株在毒性机制方面具有一些新的特点,值得进一步地深入探讨。为研究东湖假单胞菌HYS菌株对秀
【基金项目】
：
国家自然科学基金（No.31570090,No.210900097）项目； 国家微生物资源平台项目（NIMR-2020-8）；
论文部分内容阅读
假单胞菌在自然界中分布广泛,是常见的一类环境微生物,其中的致病性菌株在细菌致病机理方面均有重要的研究价值。东湖假单胞菌（Pseudomonas donghuensis）HYS菌株是本实验室从东湖水域分离鉴定命名的,前期研究发现其对秀丽隐杆线虫的慢性致死作用比铜绿假单胞菌PAO1和PA14菌株更为强烈,提示了该菌株在毒性机制方面具有一些新的特点,值得进一步地深入探讨。为研究东湖假单胞菌HYS菌株对秀丽隐杆线虫的毒性机制,本实验室前期构建了东湖假单胞菌HYS菌株转座子插入突变库,经初筛复筛和基因定位后获得突变株68株,可用于东湖假单胞菌HYS菌株与秀丽隐杆线虫慢性致死模型作用机制研究。通过对转座子突变库的筛选发现跨膜蛋白anti-σ因子（反σ因子）RsiW参与调控细菌毒性。RsiW与选择性的胞外功能sigma因子（ECF sigma因子）SigW构成反σ因子/σ因子系统,sigma因子协助RNA polymerase（RNAP）特异性识别启动子起始RNA的合成,ECF sigma因子通过调节毒力因子相关基因的表达,从而影响细菌毒性,这是假单胞菌最重要和最常见的毒性调节机制之一。为了明确HYS菌株的毒性与RsiW/SigW系统的关系,从而探讨HYS菌株的毒性调控机制,本研究开展了以下工作:一、基因rsiW参与HYS菌株对秀丽隐杆线虫毒性作用的验证与分析。对实验室前期构建的转座子插入突变库中编号为0201 7A的突变菌株进行验证,发现其相对于野生型HYS菌株对秀丽隐杆线虫具有毒性减弱现象。根据对该突变菌株插入位点基因组定位的信息,通过构建相应基因rsiW的缺失突变株与回补菌株,进行慢性致死实验,检测发现喂食ΔrsiW的秀丽隐杆线虫LT50为5.053±0.143 d,相对野生型HYS菌株处理的LT50能够延长约2 d。以上结果表明,东湖假单胞菌HYS菌株中基因rsiW确实与其对秀丽隐杆线虫毒性相关。二、确定反σ因子RsiW与σ因子SigW互作,共同参与假单胞菌HYS菌株对秀丽隐杆线虫毒性。通过对基因rsiW在基因组位置的分析,结合生物信息学预测,设计共转录实验发现在基因rsiW前面有一个注释为RNA polymerase subunit sigma-24(σ24)的基因与rsiW在转录水平为共转录。通过酵母双杂交实验发现注释为σ24的基因编码的蛋白为与RsiW在翻译后水平存在互作,σ24命名为SigW。通过HYS菌株中基因sig W与sig W-rsiW敲除株和回补株的慢性致死实验,结果发现喂食Δsig W与Δsig W-rsiW的秀丽隐杆线虫不具有减毒现象,但喂食Δsig W（p BBR2-sig W）、HYS（p BBR2-sig W）与Δsig W-rsiW（p BBR2-sig W）具有减毒现象,这表明基因sig W与东湖假单胞菌毒性有关。结合荧光定量PCR测定实验菌株相关基因的表达量分析发现减毒菌株Δsig W（p BBR2-sig W）、HYS（p BBR2-sig W）和Δsig W-rsiW（p BBR2-sig W）中sig W的表达量相对rsiW显著增加,这表明该系统可能是以sig W表达量显著高于rsiW的差异表达形式参与东湖假单胞菌HYS毒性。上述结果显示,SigW/RsiW系统共同参与假单胞菌HYS菌株对秀丽隐杆线虫毒性,且存在一定的剂量效应,为后续研究该系统在HYS菌株的毒性机制中的地位提供基础。三、初步探讨HYS菌株的SigW可能参与的毒性调控途径。实验室前期研究中已经发现HYS菌株中的Gac系统、泛酸合成通路、Cbr/Crc系统以及铁载体合成通路与毒性有关。为确定与SigW相关的毒性调控途径,通过设计荧光定量实验发现基因sig W在转录水平上不受的Gac系统调控,且基因sig W在转录水平上与泛酸合成通路、Cbr/Crc系统以及铁载体合成通路中关键基因pan B、cbr A、pvd A均不存在直接相关性。这暗示着本研究中的SigW与HYS菌株中已知的毒性调控系统不存在直接联系,可能通过间接作用或者SigW与已知的四条通路为平行关系,参与毒力作用,为深入展开之后HYS菌株的毒性机制研究提供基础的背景信息支持。综上所述,本研究确定了SigW/RsiW（σ因子/反σ因子）系统与HYS菌株对秀丽隐杆线虫毒性相关,且在基因sig W与rsiW的表达量存在显著差异时影响其毒性;发现了HYS菌株的SigW与Gac系统、泛酸合成通路、Cbr/Crc系统以及铁载体合成通路不存在直接联系,可能通过间接调控或参与其余毒力相关途径,具体调控方式尚未开展研究,这为研究HYS菌株的毒性调控机制提供了新线索,也为未来HYS菌株可能引起的动物感染治疗提供思路。
其他文献
国有企业是发展社会主义市场经济的重要参与者,肩负实现国有资本保值增值、防止国有资产流失的责任。近年来党中央、国务院反复强调国有企业和国有资本审计工作,通过出台相关系列法规政策,明确要求加大审计检查力度。2019年7月,中共中央办公厅与国务院办公厅（以下简称两办）最新出台了《党政主要领导干部和国有企事业单位主要领导人员经济责任审计规定》（以下简称新规定）,便于审计机关开展领导人员经济责任审计。新规定
目的:在脑发育中,谷氨酸能系统参与细胞生存、分化,维持递质平衡、突触间信号的传导及神经行为发生。流行病学调查提示,孕期地塞米松的周期性使用是子代行为失常的重要危险因素,但其潜在的机制尚不清楚。本研究拟观察孕期地塞米松暴露（prenatal dexamethasone exposure,PDE）雌性子代海马谷氨酸能系统和神经行为改变,探讨其宫内编程机制。方法:（1）动物实验:Wistar孕鼠从孕9天
经济是肌体,金融是血脉,两者共生共荣。金融活则经济活,金融稳则经济稳。金融机构是金融市场中最重要的参与者,而商业银行在金融机构体系中居主体地位,乃至在国民经济中都位居特殊而重要的地位。防范化解金融风险,关乎国家发展全局和人民财产安全,更是实现高质量发展必须跨过的重大关口。金融审计作为国家审计的重要组成部分,对商业银行负有监督、鉴证和评价职责。而商业银行操作风险审计作为金融审计的一部分,通过揭示商业
内部控制信息是企业财务信息的一种重要补充,能够缓解利益相关者与企业管理层之间的信息不对称问题,因而投资者对于内部控制信息的披露有着强烈需求。我国内部控制审计制度发展较晚,自2011年开始才逐步实施强制内部控制审计政策,自此内部控制审计报告也受到越来越高的重视。在这种背景下,研究否定意见内部控制审计报告会对上市公司筹资产生什么样的影响具有理论意义和实践价值。本文对否定意见内部控制审计报告以及企业筹资
＜正＞宁国资委企[2020]19号各市属企业、各区国资办:现将《支持引导国有企业积极投入疫情防控的政策措施》印发给你们,请认真贯彻落实。2020年2月14日支持引导国有企业积极投入疫情防控的政策措施为认真贯彻党中央、国务院和省委省政府、市委市政府关于疫情防控的决策部署,全面落实市委市政府《关于促进中小微企业稳定发展的若干措施》（宁委发[2020]4号）,引导全市国有企业在疫情防控中主动作为、勇挑重
背景:水稻是全世界主要的粮食作物。褐飞虱是水稻专食性害虫,以口针刺吸韧皮部汁液,对水稻生产安全造成严重威胁。培育抗性品种是防治褐飞虱最经济环保的方式。目的:从全球水稻核心种质库中发掘抗褐飞虱资源和基因。方法:为了加速开发新的抗性材料,本研究从3k水稻基因组计划（3kRGP）资源中随机挑选1487份水稻组成自然群体,在苗期鉴定了褐飞虱生物型3取食后虫增重表型数据,利用从3kRGP变异数据库中过滤得到
水韭属（Isoetes L.）是水韭科（Isoeteceae）唯一幸存的属,起源于古老的石松类植物,是最早出现的维管植物类群之一,有着特殊的进化地位,能够适应一系列的生境类型。同时,也是最古老的具有景天酸代谢途径（CAM,Crassulacean Acid Metabolism）的植物类群,是水生CAM植物的典型代表。然而,关于水韭属植物的CAM代谢途径的起源与进化机制并不清楚。PEPC基因（ph
就企业成长而言,扩张战略几乎是企业必经阶段,尤其是在企业初创及高速发展阶段,外延扩张总是不二选择。不管是何种形式的扩张战略,都需要公司财务政策的支持配合。企业通过适当的投资,加强自身的实力,以使扩张战略得以顺利进行。扩张战略及相应的投资又需要恰当的筹资政策（包括股利政策）,从而实现战略协同目标。战略协同的效果如何,最终体现于企业目标的实现与否。故扩张战略、财务政策之间是否协调有效,关键还是要靠企业
微生物常以较高密度普遍存在于被子植物的花蜜中,并在不同生境以及生物互作过程中发挥着重要的生态功能。由于微生物大多通过与植物长期稳定互作的传粉者移入花蜜,传粉者访问前的花蜜一般是无菌的。但食蜜啃食者和体型较小无传粉效率的偷蜜者等也可直接接触花蜜,且不同传播载体携带的微生物种类和数量往往存在差异,因此有必要深入探究各种传播媒介在花蜜微生物群落构建中的作用。此外,已有假说认为栖息于花蜜中的酵母具有较强的
肿瘤是DNA损伤和变异引起的一种疾病,据世界卫生组织（World Health Organization,WHO）数据显示,肿瘤新发病例在逐年递增,预计到2030年这一数值将达到2200万例。因此,肿瘤的预防和治疗是全世界共同关注的健康问题。肿瘤免疫疗法是激发机体自身的免疫应答对肿瘤实施杀伤和清除,是继常规三大肿瘤治疗手段之后的第四种治疗模式。本研究以常见的恶性肿瘤结直肠癌的T细胞过继免疫疗法为研