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卵母细胞激活是核移植的关键步骤之一,卵母细胞激活率的高低直接影响核移植的效率。当前核移植效率低下,其原因之一就是受体卵母细胞未被充分激活。研究哺乳动物卵母细胞的激活及其以后的孤雌胚发育,有利于探索卵母细胞的生理反应,分析理化激活和精子激活的特征,对阐明哺乳动物卵激活、受精与发育机理等均有十分重要的意义。到目前为止,已对多种哺乳动物卵母细胞激活进行了一系列研究,但有关猪成熟卵母细胞体外激活的研究尚不够深入。本试验以体外成熟的猪卵母细胞为材料,以电脉冲、离子霉素、6-二甲氨基嘌呤（6-DMAP）、细胞松弛素B（CB）为人工刺激条件,以孤雌胚早期不同发育阶段的出现比率验证人工激活卵母细胞的效果,研究几种不同激活方法对猪体外成熟卵母细胞人工激活效果的影响,以寻找一种猪卵母细胞较优的人工激活方法,为提高猪核移植技术的成功率提供技术参考。 电激活对猪卵母细胞激活及其孤雌胚发育的影响:应用宁波新芝公司的CRY-3型细胞融合仪和配套的电极板（间距0.5mm）对猪IVM培养44～48小时的卵母细胞以不同电场强度(1.0KV·cm-1,1.3 Kv·cm-1,1.5 Kv·cm-1,2.0KV·cm-1)、不同脉冲时程（40μs,80μs,100μs,150μs）和不同脉冲次数（1次、2次、3次,每次脉冲间隔10min）进行激活。结果表明:卵母细胞的激活率和孤雌胚发育率随电场强度、脉冲宽度和脉冲次数的变化而变化。（1）固定脉冲宽度和脉冲次数选择场强组:当固定固定脉冲宽度为80μs和脉冲次数为1次,选择场强为1.3 KV·cm-1时,激活率和卵裂率分别达到了68.75%（110/160）和74.54%（82/110）,显著高于场强为1.0KV·cm-1实验组（44.38%,71/160;50.70%,36/71）,差异极显著（P<0.01）。场强继续升高,卵母细胞的激活率和卵裂率反而下降。场强为1.5 KV·cm-1,2.0KV·cm-1时,卵母细胞的激活率和卵裂率分别为56.25%（90/160）,64.44%（58/90）;54.38%（87/160）,60.92%（53/87）,显著低于场强为1.3 KV/cm实验组（P<0.05）。（2）固定场强和脉冲次数选择脉冲宽度组:在1.3 KV·cm-1场强,1次脉冲下,脉宽80ps时,卵母细胞的激活率和卵裂率达70.63%（113/160）和75.22%（85/113）,显著高于脉宽为401μs实验组（50.63%,81/160;53.09%,43/81;P<0.05）。脉宽进一步升高并不能使卵母细胞的激活率和孤雌胚的发育率升高。脉宽为10Ops和150μs时,卵母细胞的激活率和卵裂率分别为55.63%（89/160）,67.42%（60/89）;53.13%（85/160）,57.65%（49/85）,也显著低于脉宽为80μs实验组（P<0.05）。（3）固定场强和脉冲宽度选择脉冲次数组:在场强为1.3 KV·cm-1场强下,脉宽80μs,1次脉冲时,卵母细胞的激活率和卵裂率为71.25%（114/160）和75.44%（86/114）,显著高于2次脉冲（56.88%,91/160;60.44%,55/91）和3次脉冲（53.75%,86/160;56.98%,49/86）,差异极显著（P<0.01）。说明一次脉冲就可以使猪卵母细胞充分激活。以上结果表明:以1.3KV·cm-1电场强度80μs的脉冲宽度,一次脉冲的电激活条件对猪卵母细胞进行刺激,可