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目的观察高糖和甲基化抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-aza-dCyd)对人肾小球系膜细胞(HMCs)结缔组织生长因子(CTGF)基因启动子的甲基化状态和基因表达的影响。方法(1)用含不同浓度D-葡萄糖的DMEM培养基(5mM(正常糖)、30mM(高糖))培养HMCs(0、24、48、72h),分别于各时间点提取基因组DNA、总RNA、蛋白质,并收集细胞培养液。MSP检测细胞CTGF基因启动子的甲基化状态,RT-PCR检测CTGF mRNA表达,Western印迹检测CTGF蛋白的表达,ELISA检测细胞培养液中纤维连接蛋白(FN)的表达。(2)用不同浓度5-aza-dCyd(0、1、2、5、10uM)刺激HMCs 48h,提取细胞基因组DNA、总RNA和蛋白质。MSP检测细胞CTGF基因启动子的甲基化状态,RT-PCR检测CTGFmRNA表达,Western印迹检测CTGF蛋白的表达。结果(1)正常糖组HMCs各时间点CTGF基因启动子呈半甲基化状态;高糖组HMCs CTGF基因启动子在0h呈半甲基化状态,甲基化条带较强;24h甲基化条带减弱,非甲基化条带增强;48h甲基化阴性,呈完全去甲基化状态;72h重新出现甲基化条带,非甲基化条带减弱。(2)正常糖组HMCs不同时间点表达微量的CTGFmRNA和蛋白质,差异无统计学意义(均P＞0.05);高糖作用细胞24h、48h、72h,与0小时比较CTGF mRNA和蛋白质均表达增加,差异有统计学意义(均P＜0.01),CTGF mRNA和蛋白质表达高峰均在48h。高糖刺激细胞24h、48h、72h,与正常糖组各相应时间点比较CTGFmRNA表达均增加,差异有统计学意义(P值分别为P＜0.01,P＜0.01,P＜0.05);高糖刺激细胞24h、48h、72h,与正常糖组各相应时间点比较CTGF蛋白表达均增加,差异有统计学意义(均P＜0.01)。(3)正常糖组HMCs不同时间点培养液上清中均有FN表达,差异无统计学意义(均P＞0.05);高糖作用细胞24h、48h、72h,与0小时比较FN表达均增加,差异有统计学意义(均P＜0.01),FN的表达高峰在72h;高糖作用细胞24h、48h、72h,与正常糖组相应时间点比较FN表达均增加,差异有统计学意义(均P＜0.01)。(4)经不同浓度5-aza-dCyd处理48h,0、1、2、5uM 5-aza-dCyd组CTGF基因启动子呈半甲基化状态,10uM 5-aza-dCyd组CTGF基因启动子甲基化阴性,呈完全去甲基化状态。(5)0、1、2、5uM 5-aza-dCyd组均有微量CTGF mRNA和蛋白的表达,差异无统计学意义(均P＞0.05)。与OuM 5-aza-dCyd组比较,10uM 5-aza-dCyd组CTGFmRNA和蛋白表达增加,差异有统计学意义(均P＜0.01)。结论高糖诱导HMCs CTGF基因启动子的去甲基化,刺激CTGF的表达和FN的分泌,呈时间依赖性;5-aza-dCyd诱导HMCs CTGF基因启动子的去甲基化和CTGF的表达;提示DNA甲基化可能参与了HMCs CTGF基因表达的调控。