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奶粉是我国主要乳制品之一,所占比例达到三分之一。奶粉中蛋白质含量约17%-25%,含有全部必需氨基酸,是一种高效吸收的全价蛋白质。蛋白质的含量高低是奶粉质量好坏的评价标准之一。随着生活质量的提高,人们的健康意识越来越强,对乳制品的需求也越来越高。近年来,奶粉掺假事件使得蛋白质含量检测的经典方法——凯式定氮法已不能满足要求。蛋白质基本组成单位氨基酸组分的检测成为新型蛋白质检测方法,而这方面报道甚少。奶粉中含硫氨基酸含量较低,且不易准确测定。酸水解中部分损失,碱水解中完全损失,一般用过甲酸氧化水解法处理,但此法操作繁琐,耗时长。除此外,疏基还原剂如疏基乙酸(TGA)、疏基乙醇(BME)和二硫苏糖醇(DTT)也可用来保护含硫氨基酸。高效液相色谱法(HPLC)是目前氨基酸检测使用最普遍的方法,4-氯-3,5-二硝基三氟甲苯(CNBF)是一种新型衍生试剂,本文用CNBF作为衍生剂,产用HPLC法来分析检测奶粉中含硫氨基酸。本文通过酸水解法,氧化水解法,TGA. BME及DTT作用下酸水解法五种前处理方法来水解奶粉,经HPLC法对其含硫氨基酸含量进行分析与检测,建立奶粉中含硫氨基酸含量检测的最佳前处理条件。本文Met.(Cys)2、Cys最低检出限(LOD)分别为0.7、0.3、0.5μmol/L,最低定量限(LOQ)均为10μmol/L,在10-1000μmol/L范围内,线性良好,灵敏度高。1.30mg奶粉在3mL6mol/L HCl(含0.1%苯酚),110。C条件下水解20h后,测定奶粉中Met含量为0.43g/100g,回收率95%,(Cys)2含量0.06g/100g,回收率60%,此法能准确测定Met含量,但(Cys)2损失大。2.氧化水解后,奶粉中Met、(Cys)2含量分别为0.44g/100g、0.15g/100g,回收率均达到95%,此法可准确检测奶粉中含硫氨基酸,与酸水解相比,Met含量一致,(Cys)2为酸水解的2.5倍。3.最佳TGA浓度为0.9%,最佳BME浓度4.0%,但因4.0%BME作用下Cys回收率极低,选择0.9%TGA作用于奶粉酸水解,经检测其Met含量为0.38g/100g,(Cys)2含量为0.15g/100g,前者回收率102%,后者55%左右,此法(Cys)2检测含量与前者方法一致,但Met含量有所减小。4.最佳DTT作用条件为1mL水解液中加入0.1mol/LDTT100μL,室温反应1h。测得奶粉中Met含量为0.37g/100g,(Cys)2含量为0.14g/100g,与0.9%TGA结果一致,回收率85%左右。另外,还检测了六种不同品牌奶粉含硫氨基酸含量。五种前处理方法,氧化水解法检测结果最佳,DTT最适用于含硫氨基酸的保护。本文为奶粉中含硫氨基酸含量的准确测定提供一定数据参考及实验依据,为消费者的健康提供一定的理论保障。