从Wnt/β-catenin信号通路研究淫羊藿总黄酮对衰老大鼠小肠干细胞增殖分化功能的调节作用

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目的:研究淫羊藿总黄酮(Total Flavones of Epimedium,TFE)对自然衰老大鼠空肠干细胞增殖分化功能的调节作用及对干细胞微环境中Wnt/β-cate nin信号和BMP信号表达变化的影响。  方法:(1)将45只18月龄SPF级雄性S D大鼠随机分为3组:24M衰老模型组、淫羊藿总黄酮低剂量组、高剂量组,每组15只。其中淫羊藿总黄酮低、高剂量组分别给予淫羊藿总黄酮10mg/kg/day、20mg/kg/day,衰老模型组给予生理盐水灌胃至24月龄,每周停药一天,连续6个月。另取15只6月龄雄性SD大鼠作为6M成年对照组。  (2)HE染色观察自然衰老大鼠空肠形态学的变化。  (3)PAS染色观察自然衰老大鼠空肠杯状细胞的数量变化。  (4)免疫荧光法观察活化状态空肠干细胞标记物LGR5的表达情况。  (5)免疫组化法观察自然衰老大鼠空肠Bmi1、PCNA、β-catenin、BMP4的表达情况。  (6)Western blot法观察衰老大鼠β-catenin、Dkk1、GSK-3β、BMP2的表达变化情况。  结果:  (1)HE染色结果显示:与6M成年对照组比较,24M衰老模型组空肠绒毛长度明显变短,排列疏松且不够规则,隐窝变浅。给予淫羊藿总黄酮6个月后,与24M衰老模型组比较,大鼠空肠绒毛长度增加,隐窝变深,绒毛排列更为密集。  (2)PAS染色及PCNA免疫组化结果显示:与6M成年对照组比较,衰老模型组PCNA表达量及杯状细胞数量均降低,给予淫羊藿总黄酮保护后PCNA表达量增高,杯状细胞数量增加。  (3)免疫组织化学(荧光)结果显示,与6M成年对照组比较,24M衰老模型组空肠干细胞数量减少,给予淫羊藿总黄酮保护后,干细胞数量增多。  (4)Western blot和免疫组化实验结果显示,与6M成年对照组比较,24M衰老模型组小肠干细胞微环境中β-catenin、BMP2、BMP4表达量降低,Dkk1、GSK-3β表达量升高,淫羊藿总黄酮可以上调衰老模型组β-catenin、BMP2、BMP4的表达,下调Dkk1、GSK-3β的表达。  结论:淫羊藿总黄酮可以增强自然衰老大鼠空肠干细胞的增殖分化功能,其作用机制可能与调节干细胞微环境中Wnt/β-cate nin信号和BMP信号关键分子的表达相关。
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