论文部分内容阅读
目的:研究7-二氟甲氧基-5,4’-二甲氧基金雀异黄素(7-difluoromethoxy-5,4’-dimethoxygenistein,DFMG)对LPC处理巨噬细胞增殖活性和Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)及下游髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,My D88)信号传导的作用。方法:体外培养人单核细胞(THP-1)系细胞,佛波酯(PMA)诱导THP-1系细胞分化为巨噬细胞。溶血性磷脂酰胆碱(Lysophosphatidylcholine,LPC:3.0、10.0、30.0、100.0μM)孵育巨噬细胞12h,制备LPC处理巨噬细胞模型。分别给予不同剂量的DFMG(0.3、1.0、3.0μM)孵育LPC处理巨噬细胞模型不同时间段(6h、12h、24h、48h),同时,设模型对照组和溶媒对照组,用CCK-8法检测细胞增殖活性。DFMG(0.3、1.0、3.0μM)、洛伐他汀(50μM)、TLR4拮抗剂(1μg/ml)、LPS(1μg/ml)分别作用LPC处理巨噬细胞模型12h,另设溶媒对照组,收集细胞培养液上清,ELISA法检测人肿瘤坏死因子-α(Tumor Necrosis Factor-alpha,TNF-α)的表达。用DFMG(3.0μM)、洛伐他汀(50μM)、TLR4拮抗剂(1μg/ml)、LPS(1μg/ml)分别作用LPC处理巨噬细胞模型12h,另设溶媒对照组,收集细胞,Western blotting检测TRL4、My D88蛋白表达。结果:1.PMA150 n M诱导THP-1细胞24h,其分化为巨噬细胞的百分率(39.67±0.05)%,显著高于未处理组(0.55±0.19)%,差异具有统计学意义(P<0.05),因此,选用150 n M为PMA诱导源自THP-1细胞系巨噬细胞的浓度。2.不同浓度LPC(3.0、10.0、30.0、100.0μM)处理巨噬细胞12h,台盼蓝拒染法测得巨噬细胞存活率分别为:(95.83±2.08)%、(86.17±2.62)%、(52.43±1.59)%、(38.19±1.20)%,与细胞对照组比较均有统计学意义(P<0.001)。3.CCK-8试剂盒检测结果显示:与细胞对照组相比,30.0μM LPC抑制细胞增殖活性(P<0.05)。选择LPC30.0μM作为LPC处理巨噬细胞模型的造模浓度。4.DFMG以时间和浓度依赖方式增高LPC处理巨噬细胞增殖活性。5.ELISA结果显示:DFMG以浓度依赖方式降低LPC处理巨噬细胞培养液TNF-α浓度(P<0.001)。6.Western blotting结果显示:30.0μM LPC、1μg/ml LPS作用于巨噬细胞12h,上调巨噬细胞TLR4、My D88蛋白表达(P<0.001)。7.3.0μM DFMG与TLR4拮抗剂处理抑制LPC上调巨噬细胞TLR4、My D88蛋白的表达作用(P<0.001)。结论:1.LPC抑制巨噬细胞增殖活性、增加TNF-α分泌,并上调TLR4、My D88蛋白表达。2.DFMG能有效对抗LPC抑制巨噬细胞增殖作用及拮抗LPC诱导巨噬细胞TNF-α分泌效应。3.DFMG拮抗LPC抑制巨噬细胞增殖和诱导TNF-α分泌作用与其抑制TLR-4-My D88信号转导相关。