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背景和目的幽门螺杆菌(Helicobacterium pylori)感染与人胃炎、消化性溃疡、胃腺癌等疾病的发病密切相关。在许多细菌致病过程中,首先对其合适的宿主寄生部位进行趋化和定植,然后大量繁殖引起疾病。近年发现,细菌趋化(chemotaxis,Che)受二元信号传导系统(two-component signaling,TCS)调控。CheA/CheY是幽门螺杆菌趋化相关TCS,CheA和CheY突变株虽有动力,但不能定植于小鼠胃粘膜,提示Che-TCS在细菌定植中起关键作用。然而,幽门螺杆菌Che-TCS的激活信号及其阻断药物至今未见报道,该Che-TCS的工作机制仍有待于深入研究。本研究中,我们克隆了幽门螺杆菌NCTC11637株CheA和CheY基因并构建了原核表达系统,制备了目的重组表达产物rCheA和rCheY抗血清及其IgG,采用硬琼脂法(hard agar plus,HAP)建立了幽门螺杆菌体外趋化模型,并对幽门螺杆菌体外趋化诱导物进行了筛选,以期为进一步阐明幽门螺杆菌Che-TCS信号传导及其调控机制奠定基础。实验方法PCR扩增幽门螺杆菌NCTC11637株全长cheA和cheY基因片段,T-A克隆后测序。构建上述目的基因原核表达系统,采用SDS-PAGE和BioRad凝胶成像分析系统检查目的重组蛋白rCheA和rCheY的表达情况,Ni-NTA亲和层析法提纯rCheA和rCheY。rCheA和rCheY免疫家兔获得抗血清,用饱和硫酸铵沉淀法和DEAE-32离子交换法提纯IgG,用免疫扩散法检测抗血清及其IgG效价。采用硬琼脂法建立幽门螺杆菌NCTC11637株体外趋化模型并检测11种物质的趋化诱导作用,同时分别观察抗rCheA IgG(rCheA-IgG)和氯氰碘柳胺钠对细菌趋化的抑制作用。结果PCR扩增获得预期大小的cheA和cheY基因片段,其核苷酸和氨基酸序列与文献报道完全相同。所构建的原核表达系统能有效表达rCheA和rCheY。rCheA和rCheY兔抗血清及其IgG免疫扩散效价均分别为1:4和1:2。盐酸、硫酸和乙酸对该幽门螺杆菌均有趋化诱导作用,一定浓度的rCheA-IgG和氯氰碘柳胺钠均对幽门螺杆菌趋化有抑制作用(P＜0.05)。结论本研究成功地构建了幽门螺杆菌NCTC11637株cheA和cheY基因原核表达系统。H~+是诱导幽门螺杆菌趋化的信号物质,rCheA-IgG和氯氰碘柳胺钠均能抑制幽门螺杆菌对H~+的趋化。