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前言 细菌内毒素Lipopolysaccharide(LPS)是革兰氏阴性菌细胞壁的成分，又称脂多糖，它可以刺激巨噬细胞产生细胞因子，自由基，脂类等物质，少量上述物质可激活免疫系统，杀病原微生物，大量时可产生细胞毒性，目前很多研究将LPS作为诱导NO生成的常规物质，我们在实验中加入LPS，观察其对内耳器官的毒害作用。目前内耳疾病病因不明，且尚无有效的治疗药物。有些学者认为：NO过量或不足均可以产生以急性或渐进性耳鸣，眩晕，听力减退为特征的各种内耳疾病。为此我们用LPS诱发培养器官合成NO，在体外培养的器官内构建了NO/NOS介导的内耳耳毒性模型，我们用诱导型一氧化氮合酶(inducible isoform of nitric oxide synthase iNOS)特异阻滞剂S-Ethylisothiourea(EIT)加以保护。实验结果提示：iNOS特异阻滞EIT具有高效拮抗LPS所致的内耳毒性作用 实验材料 1．取材与分组：取新生3天的Wistar大鼠30只随机分组 第一组：正常对照组 第二组：只给50ug/ml LPS组 第三组：只给200ug/ml LPS组 第四组：只给100nM EIT组 第五组：给200ug/ml LPS+100nM EIT组 2．主要试剂及仪器：内耳器官培养液、EIT、LPS(均购自Sigma公司)，内耳器官培养设备、显微图像采集系统。 实验方法 将新生3天的Wistar大鼠，断头，取出听泡，将听泡置于Hanks液中，取出耳蜗，去除血管纹，螺旋韧带，前庭膜获得全耳蜗的基底膜，放人培养液或合处理因素的培养液中培养48h后，用4％多聚甲醛4t下固定4 ／J’时，再用PBS和溶于PBS的1％Titon－Xll漂洗3次，用 PHAuONDIN－TRITC荧光染色剂染色30分钟，后行全基底膜铺片，在荧光显微镜下，观察内毛细胞，外毛细胞，所有实验数据以均值上标准差＊。S）表示，用1检验，进行统计学分析。 实验结果 正常培养48／J’时的内政十毛细胞均无损伤；在含100nM EIT的培养液中培养兆h后，内产毛细胞几无损伤；在含soUg／Mlls的培养液中培养48h后，内政毛细胞有轻微损伤；在含200fig／mlLPS的培养液中培养48h后，内、外毛细胞有中重度损伤；在含200ug／Inl LPS＋100nM EIT的培养液中培养48h后，内政毛细胞的损伤均减弱，后两者具有显著性差异h＜0刀1人 讨 论 LPS是革兰氏阴性细菌细胞壁的成分，很多研究将LPS作为诱导iNOS合成的常规物质，NO／NOS是影响内耳的生理、病理功能的重要因素，我们在实验中发现，在含 50fig／ml IyS培养液中培养48h后，内毛细胞和外毛细胞有轻微损伤，单独使用EN，由于只抑制i NOS诱导生成大量有损害功能的 NO，而不抑制由 CNOS ·2·合成的少量NO对内产毛细胞所起的正常生理作用，所以对内毛细胞，外毛细胞没有副损伤，在含 LPS＋EIT的培养液，培养48h的内J毛细胞，基本恢复正常状态，是因为EIT是一种iNOS特异性阻滞剂，可特异阻滞iNOS诱导产生的NO引起的内J毛细胞的损伤，提示：EIT具有桔抗LPS所致的内耳损伤的功能。 结 论 EIT对LPS所致的体外培养的内政毛细胞的损伤，具有保护作用。