课题意义大肠侧向发育型肿瘤（LST）是指起源于大肠粘膜的一类隆起型病变。这类病变极少向肠壁深层垂直侵犯,而主要沿粘膜表面呈侧向浅表扩散。尽管大肠侧向发育型肿瘤的生长模式特殊,但是它的癌变率并不低。目前,大肠侧向发育型肿瘤癌变方式以及侧向生长模式的机制并不明确。仅通过内镜下经验诊断后给予治疗,并不能彻底解决大肠侧向发育型肿瘤的诊断与治疗的遗留问题。因此,研究大肠侧向发育型肿瘤癌变方式的机制以及侧向生长模式的机制,是必须的。目前,国内外有关大肠侧向发育型肿瘤的研究大多数为以标本为来源,极少数研究使用大肠侧向发育型肿瘤细胞株为来源。建立大肠侧向发育型肿瘤细胞株,是研究大肠侧向发育型肿瘤癌变机制以及侧向生长模式的机制的必经之路。建立大肠侧向发育型标本库,则能为未来验证大肠侧向发育型肿瘤癌变机制以及侧向生长模式的机制做铺垫。课题目的建立大肠侧向发育型肿瘤标本库以备未来课题需要,摸索大肠侧发育型肿瘤建株的方法。课题材料大肠侧向发育型肿瘤病人血液标本、粪便标本、病变标本、病变旁正常标本、大肠侧向发育型肿瘤蜡块、无水乙醇、PBS粉剂、二甲苯、山羊血清、内源性过氧化氢物酶阻断剂、EDTA、SOX2一抗、OCT4一抗、BMI1一抗、小鼠二抗、兔二抗、BSA、DAB、苏木素、染色架、染色缸、湿盒、免疫组化笔、培养基、PBS、双蒸水、多聚赖氨酸、小牛血清、抗生素、胰岛素、转铁蛋白、表皮生长因子、手套、口罩、保温盒、移液器、枪头、一次性移液管、离心管、棉球、眼科剪、眼科镊、gentle MACS Octo Dissociator八通道处理器、C分离管、胶原蛋白酶Ⅳ型、胶原蛋白酶Ⅰ型、胰酶、培养瓶、培养皿、培养板、奥林巴斯X73倒置显微镜、微波炉、烤箱、蜡块切片机等。课题方法血液成分离心分离法、免疫组化法、原代培养、传代、显微镜观察等。课题结果初步建立大肠侧向发育型肿瘤血浆库、血清库、血细胞库、粪便库、病变库、病变旁正常标本库,定性验证BMI1、OCT4、SOX2大肠侧向发育型肿瘤中的表达,建立大肠侧向发育型肿瘤细胞系。课题结论1.大肠侧向发育型肿瘤血浆库、血清库、血细胞库、粪便库、病变库、病变旁正常标本库在严格执行完善的标本库获取流程下建立成功。2.免疫组化法定性验证干性相关分子BMI1、OCT4、SOX2大肠侧向发育型肿瘤中的表达,提示大肠侧向发育型肿瘤建株存在可行性。3.完善的标本获取及保存方法、无菌操作原则以及抗生素的运用等细节操作能尽量避免大肠侧向发育型肿瘤原代细胞及传代细胞的真菌及细菌污染。4.酶消化法较组织块培养法能够提高大肠侧向发育型肿瘤原代培养中单细胞贴壁数量。5.适当的胶原酶使用能够提高大肠侧向发育型肿瘤原代培养中单细胞贴壁数量。6.适当的多聚赖氨酸、胶原酶及gentle MACS Octo Dissociator能提高大肠侧向发育型肿瘤原代培养中细胞贴壁数量。7.适当的多聚赖氨酸、胶原酶、gentle MACS Octo Dissociator及改良培养基能提高大肠侧向发育型肿瘤原代培养及传代培养中细胞增殖速度。8.差速消化法能够提高大肠侧向发育型肿瘤传代培养中细胞贴壁数量。9.大肠侧向发育型肿瘤细胞系是能够建立的。