成功的基因治疗必须具备两个条件，即成熟的DNA克隆技术和有效的基因转移手段。脂质体作为外源基因的转移载体，具有显著的优点。　　 本课题在细胞水平上对阴离子型pH敏感脂质体作为化学药物和核酸药物靶向巨噬细胞给药系统进行了研究探讨。　　 首先以水难溶性药物布洛芬为模型药物，制备不同处方布洛芬脂质体，建立脂质体包封率测定方法，研究处方和制备工艺，考察不同因素对布洛芬脂质体包封率的影响。利用统计学软件SPSS对试验结果进行分析和处理，确定最佳制备工艺参数，获得较高的包封率。对自制的脂质体的性质进行考察，结果表明阴离子型脂质体的zeta电位不随PS含量的增加而变化。pH敏感性考察试验结果表明阴离子型脂质体具有pH敏感性。通过巨噬细胞吞噬试验，证明了自制的阴离子型pH敏感脂质体具有巨噬细胞靶向释放化学药物的性质，为进一步制备阴离子型核酸给药系统提供初步的依据。　　 在此基础上制备载有质粒的阴离子型pH敏感性脂质体，建立载质粒脂质体的分析方法和包封率的测定方法，研究制备工艺和处方，考察不同因素对载质粒脂质体包封率的影响。确定水化时间，水化体积、和药脂比在制备过程中的最佳参数，确定最佳工艺，制备较高包封率质粒阴离子脂质体。通过比较在不同pHPBS中的释放行为，证实该阴离子型脂质体载有核酸药物时仍具有pH敏感性。粒径测定结果说明载有质粒的脂质体的粒径比空白脂质体有所增加。　　 采用两种方法制备阴离子LPD，利用PicoGreen荧光法测定LPD复合物混悬液中游离的plasmid DNA的浓度，建立了LPD复合物包封率的测定方法，该方法灵敏度高，定量准确，方法学考察符合要求。阴离子脂质体与质粒相互作用的考察表明二者之间没有直接相互作用，而是通过荷正电的鱼精蛋白介导形成三元复合物，这证实LPD复合物的形成机理与载质粒的阴离子脂质体是不同的。透射电镜下观察LPD复合物存在两种不同粒径的颗粒。LPD复合物粒径测定结果也证实了LPD复合物在制备过程中存在这两种颗粒。zeta电位的研究表明鱼精蛋白与质粒的比为1:1(w/w)时，PD复合物的zeta电位由负值变为正值。而阴离子脂质体的含量为10.0μg时，LPD的zeta电位由正值变为负值。LPD复合物包封率考察结果表明，LPD制备方法、鱼精蛋白含量、鱼精蛋白/DNA复合物孵育时间等因素对包封率有显著影响。抗核酸酶能力试验结果表明，在考察范围内，鱼精蛋白不能保护质粒DNA免受DNaseⅠ降解，但LPD复合物具有保护质粒DNA免受DNaseⅠ降解的作用。随着LPD复合物中阴离子脂质体用量的增加，保护作用增强。　　 最后以阴离子脂质体和LPD复合物为载体，分别转染两种质粒pEGFP-N2和pCMV-Luc，考察两种质粒在不同细胞系RAW264.7和bEnd.3中的表达情况。同时，采用转染效率较高的电转染方法作为阳性对照。试验结果表明，阴离子脂质体在RAW264.7细胞中的表达为阴性。电转染在RAW264.7细胞中效率约为LPD复合物的转染效率的一倍。而LPD复合物在RAW264.7细胞的转染效率较高，在bEnd.3中转染效率较低。与LPD复合物相比，lipofectamine TM2000在bEnd.3中转染效率较高，而在RAW264.7细胞的转染效率较低。因此，可得到LPD复合物在细胞水平上具有巨噬细胞靶向性的结论。细胞毒性试验表明，鱼精蛋白、自制的阴离子脂质体和LPD对巨噬细胞具有较小的细胞毒性。　　 这种阴离子的LPD复合物可能是通过pH敏感脂质体在到达溶酶体之前将鱼精蛋白和质粒复合物释放到细胞浆中，然后由鱼精蛋白输送质粒进入细胞核内部，完成递释核酸药物到细胞核内部的整个过程。　　 通过以上试验的研究结果表明，阴离子脂质体可作为巨噬细胞的靶向给药系统，同时阴离子脂质体-鱼精蛋白-DNA复合物在巨噬细胞核酸给药的领域可能具有一定的应用价值。