猪流感病毒（Swine influenza virus,SIV）是一种分为8个节段的负链RNA病毒,属于正黏病毒科。SIV感染猪后会导致猪的生产性能下降,影响猪群健康和产品质量,造成巨大的经济损失。由于猪体内同时含有禽流感受体和人流感受体,猪、禽、人流感都可以感染猪,各种流感在猪体内可以相互进行基因重排,促进了大流行性流感病毒株的出现,目前,已有一些H1N1亚型SIV能够引起人类感染,给公共卫生安全构成严重威胁。病毒的M基因编码基质蛋白M1和离子通道蛋白M2,二者在流感病毒生命周期的多个阶段起重要作用,有研究称不同谱系的M基因会影响重组病毒的致病力,目前还没有关于09年大流行源（pdm09）M基因和经典源（CS）M基因影响H1N1 SIV致病力的研究,所以,有必要对其影响致病性的相关机制进行研究,为猪流感病毒的防控提供新的思路。实验室前期分离出了两株H1N1亚型SIV代表毒株,分别是A/swine/Henan/NY361/2013（H1N1）,简称NY361,其M基因来源于pdm09 H1N1 SIV;另一株是A/swine/Hubei/HG394/2018（H1N1）,简称HG394,其M基因来源于CS H1N1SIV。通过体内试验验证两株病毒对小鼠的致病力,结果显示,HG394对小鼠的致死率远高于NY361。通过序列比对发现,NY361和HG394氨基酸同源性非常接近,二者仅在M基因上存在较大差异,其余7个基因的同源性在99.9%～100%之间,推测M基因影响二者对小鼠的致病力。为了进一步解析病毒分子致病机制,本研究以H1N1亚型猪流感病毒NY361和HG394亲本毒株为骨架,利用反向遗传操作技术,拯救出重组毒进行体内外试验,结果显示:拯救毒株与野生毒株在A549细胞上的复制能力一致,反向遗传操作没有改变重组毒的致病性;HG394对小鼠的致病力和在细胞中的复制能力均高于NY361,HG394在低温条件下的复制水平高于NY361。下一步通过对NY361和HG394进行M1、M2和M基因片段的替换,拯救并鉴定重组病毒,进一步研究pdm09源和CS源的M1、M2和M基因对H1N1亚型猪流感病毒致病力的影响。体内外研究数据表明,CS源M1基因、M2基因增强了重组病毒对小鼠的致病性和在细胞中的复制水平,CS源M2基因增强了重组病毒在小鼠鼻甲中的复制和在低温下在细胞中的复制能力。通过进一步对NY361毒株进行M1和M2基因片段替换,拯救并鉴定重组病毒。体外实验发现,CS源M1基因207AA～232AA区域和M2基因的43AA～49AA区域存在影响重组病毒的致病力和在细胞中的复制能力的关键氨基酸位点,M2基因的43AA～49AA区域存在影响重组病毒在低温下的复制能力的关键氨基酸位点。综上所述,本研究分析了CS源和pdm09源M基因对H1N1 SIV致病力的影响,并发现影响重组病毒致病力和低温下复制能力的氨基酸区域,这将有助于我们了解CS源和pdm09源M基因对H1N1 SIV生物学特性的影响,进一步提高对流感病毒致病力分子机制的认识,掌握流感病毒对人类的潜在风险,为下一次流感大流行提供可靠的理论基础。