【摘 要】
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目的研究广西茅尾海红树林植物根际土壤放线菌资源多样性及抗菌活性,为寻找新型抗菌药物奠定基础。方法采集自茅尾海的红树林土壤样品8份,采用8种分离培养基,以稀释涂布法分离纯化放线菌;通过PCR扩增和测序获得菌株16S r RNA基因序列并在数据库中搜索比对;采用邻接法构建系统进化树进行同源性物种分析,研究放线菌的多样性;放线菌液发酵后离心,留取上清液,用乙酸乙酯萃取,菌丝经丙酮浸泡萃取。分别取发酵液酯
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目的研究广西茅尾海红树林植物根际土壤放线菌资源多样性及抗菌活性,为寻找新型抗菌药物奠定基础。方法采集自茅尾海的红树林土壤样品8份,采用8种分离培养基,以稀释涂布法分离纯化放线菌;通过PCR扩增和测序获得菌株16S r RNA基因序列并在数据库中搜索比对;采用邻接法构建系统进化树进行同源性物种分析,研究放线菌的多样性;放线菌液发酵后离心,留取上清液,用乙酸乙酯萃取,菌丝经丙酮浸泡萃取。分别取发酵液酯相、菌丝浸提液2类样品;采用纸片扩散法(K-B法)测定其抗菌活性;利用双荧光蛋白报告系统(p Dualrep2)研究抗菌机制;利用TLC技术进行活性物质的初步分析;对部分菌株进行形态学和生理生化检测。结果从8份红树林根际土壤标本中共分离到261株放线菌,分属于6个目10个科19个属,微球菌科包括微球菌属(Micrococcus),节杆菌属(Arthrobacter),中国单孢菌属(Sinomonas),Paenarthrobacter和Pseudarthrobacter 5个属;诺卡氏菌科包括诺卡氏菌属(Nocardia),红球菌属(Rhodococcus)和戈登氏菌属(Gordonia)3个属;链霉菌科包括链霉菌属(Streptomyces)和北里孢菌属(Kitasatospora)2个属;分支杆菌科包括分枝杆菌属(Mycobacterium)和Mycolicibacterium 2个属;高温单孢菌科包括马杜拉菌属(Actinomadura)和珊瑚放线菌属(Actinocorallia)2个菌属;微杆菌科包括壤霉菌属(Agromyces)1个属;间孢囊菌科包括间孢囊菌属(Intrasporangium)1个属;小单孢菌科包括小单孢菌属(Micromonospora)1个属;链孢囊菌科包括小双孢菌属(Microbispora)1个属;中村菌科包括中村菌属(Nakamurella)1个菌属,其中优势菌属是小单孢菌属和链霉菌属;3株放线菌的16S r RNA基因序列与有效发表菌株Agromyces binzhouensis OAct353~T相似率分别是98.29%,98.36%和98.37%,低于98.65%可能为潜在新物种;抗菌活性检测结果表明,83株放线菌中,有32株具良好抗菌活性,阳性率为39.00%;双荧光蛋白报告系统筛选出1株链霉菌B441和1株小单孢菌B704抗菌机制类似红霉素诱导Katushka2S表达,4株链霉菌B475,B486,B353和B98抗菌机制类似左氧氟沙星引起DNA损伤的SOS反应。TLC的分析结果表明,链霉菌B353,B98,B704和B486产对金黄色葡萄球菌有活性的物质。结论广西茅尾海红树林植物根际土壤中含有丰富的放线菌资源,具有从中发现放线菌新型物种和新抗生素的潜力。
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