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水稻OsLIR1(LOC_Os01g01340)(Light Regulated protein1)是一个单拷贝核编码蛋白,很早以前OsLIR1基因在mRNA水平受光与昼夜节律调控就已经被报道,但该蛋白的功能一直未知。为研究该基因蛋白水平在光暗下的变化,本研究发展了OsLIR1基因自身启动子融合CDS的Flag标签材料(LIR1p-Flag-LIR1)。 本研究发现,OsLIR1基因的转录水平与蛋白水平都受到光的调控,但两者的表达水平却是相反的。主要表现在:OsLIR1基因的mRNA在光下积累,并在一天光照结束时达到表达最高值,在黑暗中mRNA表达逐渐降低,并在黎明前达到表达最低值;但OsLIR1蛋白水平与mRNA水平正好相反,在光照条件下OsLIR1降解,黑暗中蛋白积累,并且OsLIR1的光降解速率与光强度成正比。在MG132(蛋白酶体抑制剂)和E-64d(溶酶体酶抑制剂)处理条件下检测OsLIR1的光降解,发现LIR1的光降解不是由泛素化-蛋白酶体降解系统或溶酶体降解系统控制降解的。 通过对Flag融合标签材料进行免疫亲和纯化并结合液质联谱分析,我们找到了OsLIR1的互作蛋白铁氧还蛋白-NADP+氧化还原酶(OsLFNR)。通过酵母双杂、Co-IP等实验手段证明OsLIR1确实与LFNR1、LFNR2都互作。亚细胞定位分析表明,OsLIR1与LFNR共定位在叶绿体膜、基质和类囊体膜上。LFNR是光合电子传递过程中非常关键的酶,负责催化光合电子传递的最后一步,将电子从铁氧还蛋白传递给NADP+,生成的还原力NADPH不仅可以用于卡尔文循环中CO2的固定,还可用于清除体内活性氧造成的氧化胁迫。OsLIR1作为受光调控的蛋白,可能通过与LFNR互作对LFNR的功能进行调控。因此,深入研究OsLIR1的生理和生化功能将有助于人类更好的认识光调控植物碳代谢的分子机制。