[目 的]通过对滇重楼地上部分皂苷进行提取、纯化工艺及中试放大研究,建立滇重楼地上部分总皂苷制备方法,通过对总皂苷提取物进行化学成分、性状、鉴别、检查、特征图谱及含量测定等方面进行研究,初步建立总皂苷质量控制方法。为滇重楼地上部分总皂苷进一步的开发、利用提供科学依据。[方法]制备工艺研究:通过常规提取方法的筛选、工艺单因素考察和正交实验设计优化提取工艺,确定小试工艺,然后对提取工艺进行放大实验以考察小试工艺的稳定性和重现性;通过进行大孔吸附树脂型号筛选和树脂柱层析纯化工艺参数优化,建立总皂苷纯化方法;通过对确定的提取、纯化工艺进行中试方法试验,验证该工艺的稳定性、工业生产适用性。化学成分研究:利用硅胶柱层析、中压柱层析和化合物结构分析手段等方法等对重楼地上部分总皂苷小极性部位进行化学成分分离及结构鉴定。质量研究:参照《中国药典》2015版一部、四部及有关质量研究方法和技术要求,开展了重楼地上部分总皂苷提取物性状、薄层鉴别、检查、特征图谱和含量测定等方面的质量初步研究。[结 果]1、工艺研究经过正交优化、小试和中试放大试验,将滇重楼地上部分总皂苷的制备工艺最终定为:取地上部分粗粉,加14倍量60%乙醇回流提取3次,合并提取液,浓缩至含醇量40%。放冷,离心,滤液过HPD-100大孔吸附树脂柱,依次用40%乙醇洗脱2～2.5BV、85%乙醇洗脱2.5～3BV,收集85%洗脱液、浓缩、干燥即得。3批中试洗脱物的总皂苷平均含量达22.82%,平均转移率达89.33%;2、化学成分研究利用硅胶柱层析、中压柱层析等方法,从总皂苷小极性段(硅胶柱层析:乙酸乙酯:乙醇=23:1)共分离得到44化合物,已鉴定得到20个已知化合物,主要为脂肪酸、脂类(化合物1、10、11)、联苯(化合物17)、黄酮、苷(化合物17、18、19、20)、烯醇、酸(化合物10、11、12)、植物甾醇(化合物14)、螺甾烷(化合物6、7)、甾体皂苷(化合物19、20)等化合物,其中化合物2、3、5～7、10、11、13、15～17等11个化合物为首次从该属植物中分离得到。3、质量研究(1)薄层鉴别:以重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、H、PA、Ⅵ、Ⅶ为对照品,建立了重楼地上部分总皂苷硅胶薄层鉴别方法,该方法经方法学优化、耐用性和多批小试样品和三批中试样品验证,效果较好,可用于重楼总皂苷薄层鉴别。(2)水分:照水分测定法(《中国药典》2015版四部通则0832第二法)试验,3批重楼地上部分总皂苷中试产品水分含量分别为:5.48%、4.68%、3.50%。(3)炽灼残渣:照炽灼残渣检查法(《中国药典》2015版四部通则0841)试验,3批重楼地上部分总皂苷炽灼残渣分别为:1.31%、0.86%、0.72%。(4)重金属及有害元素:照铅、镉、砷、汞、铜测定法(《中国药典》2015版四部通则2321)试验,3批重楼地上部分总皂苷重金属含量均符合限度要求。(5)农药残留:照农药残留量测定法(《中国药典》2015版四部通则2341第一法第2项)试验,有机氯农药残留量符合《中国药典》(2015年版)四部“通则2341农药残留量测定法”下)的限度要求。(6)树脂残留溶剂残留:溶剂残留量均不超过《中国药典》2015版一、四部有关规定。(7)利用HPLC方法,建立了滇重楼地上部分总皂苷HPLC特征图谱方法,方法精密度、重复性、稳定性良好,共标定8个共有峰,指认出7个成分。6批所测供试品色谱图与对照特征图谱相似度均大于0.99。(8)含量测定:参照2015版《中国药典》一部“重楼”药材与饮片[含量测定]项下对重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ的测定方法,在原方法基础上增加重楼皂苷PA的测定,初步方法学考察结果表明,被检测成分色谱峰的理论塔板数、分离度均符合要求,准确度良好。[结 论]1.通过提取、纯化工艺研究确定了滇重楼地上部分总皂苷的制备工艺,该工艺经多次小试、中试验证稳定可行,可用于工业生产。2.通过对总皂苷主要化学成分研究,分离得到化合物44个,鉴定20个化合物结构的,基本弄清了地上部分重楼总皂苷所含的小极性主要化学成分。3.通过对地上部分总皂苷鉴别、特征图谱、含量和特征图谱、炽灼残渣和重金属检测等质量研究初步,建立了滇重楼地上部分总皂苷的初步质量控制方法。