稻瘟病菌中己糖载体蛋白基因MoRco3与MoSnf3的功能分析

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己糖载体作为一种糖转运蛋白,主要负责己糖由胞外向胞内的运输。己糖转运蛋白具有12个跨膜螺旋结构。蛋白质的构型会在糖的转运过程中发生转化。己糖载体蛋白在动物、植物以及部分微生物中都有研究,但是稻瘟病菌的相关报道甚少。本课题通过生物信息学分析,发现稻瘟病菌有67个己糖转运蛋白。其中,基因 MGG03620,MGG15700,MGG06203,MGG00040,MGG13651,MGG05946 编码的蛋白与 Neurospora crassa、Aspergillus nidulans、Saccharomyces cerevisiae 和 Colletrotrichum graminicola 的部分己糖转运蛋白高度同源。将其中4个高度同源的假定己糖载体蛋白与酿酒酵母的17个Hxt,Gal,Rgt2,Snf3进一步分析发现,四个蛋白都与己糖受体蛋白Snf3和Rgt2同源性最高。根据数据库资料分析,发现假定的己糖载体蛋白基因在附着胞形成的各个阶段表达量存在很大的差异。此外,家族中有25个基因在稻瘟病菌侵染水稻48h后表达量明显上调,表明它们可能参与了稻瘟病菌的致病过程。本文选择了其中两个基因MGG03620和MGG15700展开研究。基因MGG03620在稻瘟病菌数据库中被注释为Rco3,由于MGG15700与酿酒酵母菌Snf3高度同源,将其命名为MoSnf3。基因敲除表明,MoRco3缺失突变体生长速率明显降低、产孢量和黑色素的合成都大量减少,突变体致病性缺失且附着胞无法侵染洋葱表皮细胞。相反,MoRco3过表达突变体黑色素合成量增加,但其产孢量和致病性没有显著变化。MoSnf3缺失突变体能产生约10%的异常分生孢子,其他生长表型无明显差异。另外,基因MoRco3与MoSnf3对于低浓度的葡萄糖敏感,都有较高的表达量,因此推断两个基因可能为高亲和性己糖载体蛋白。基因MoRco3与MoSnf3在糖代谢抑制子CreA敲除背景下,基因表达量都有下降,推测己糖载体蛋白的转运与糖代谢抑制有关。
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