群体微囊藻XW01无菌化培养及全基因组测序

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微囊藻水华的暴发已造成了巨大的环境灾难。为了深入研究微囊藻分子生物学,获得微囊藻全基因组序列尤为重要,因此需要对附生有大量细菌的微囊藻藻株进行无菌化纯化。本文以水华优势藻株铜绿微囊藻XWO1(Microcystis aeruginosa XW01)为实验材料,采用了物理纯化法包括离心洗涤法、稀释划线法、超声波震荡洗涤法和UV照射除菌法、化学纯化法(抗生素处理法)研究其除菌效果。抗生素处理法中选择氨苄青霉素(Ampicillin,Amp)、卡那霉素(Kamaxin,KA)、硫酸庆大霉素(Gentamycin,Gm)、四环素(Tetracycline,TE)、新霉素(Neomycin,N)5种抗生素,通过测定XW01生长曲线和Chl a含量研究不同浓度不同抗生素对XW01生长的影响,并对微囊藻主要附生菌分离培养,测定了它们对5种常用抗生素的敏感性,选择最佳抗生素处理条件,UV照射除菌法通过测定紫外(UV)照射对藻菌生长的影响,选择最佳辐射时间,并采用组合抗生素除菌法、紫外照射除菌法及两者相结合的方法对群体微囊藻XW01进行无菌化处理。结果表明:离心洗涤法较稀释划线法、超声波震荡洗涤法除菌效果分别高68%、22%,因此只能作为纯化群体微囊藻的辅助措施。抗生素新霉素(Neomycin,N)和硫酸庆大霉素(Gentamycin,Gm)对主要附生菌有显著的抑制作用。微囊藻XW01培养液中加入5 μg/mLN和5 μg/mL Gm处理24 h,再用无抗生素的新鲜培养液洗涤后培养可获得无菌藻株。但该方法处理后的藻细胞较难存活。采用UV 1.25 μnW/cm2照射藻液30min即可除去99.99%的附生细菌,而采用抗生素处理结合UV照射10 min可获得无菌藻株。相对于用组合抗生素24 h处理,藻细胞更容易存活。提取了 XW01基因组DNA,基于测序数据组装得到XW01基因组大小为5,086,097 bp,GC 含 42.34%,共 9 个 scaffold,115 个 contig。基因组组分分析后发现,XW01的基因组含有5,187个基因,总长度为4,187,682 bp,平均长度807 bp,占基因组全长的82.34%。串联重复序列共1,303个,总长为136,813 bp,占基因组全长的2.69%。小卫星序列413个,微卫星序列546个。tRNA48个,rRNA9个。并将序列与已完成测序的铜绿微囊藻NIE843和PCC7806核酸、氨基酸进行了线性比较分析发现,核酸序列上三者有很多序列相似之处,氨基酸序列上XW01更多的与PCC7806排列相似。本研究为微囊藻纯化方面提供新的方法,获得的XW01全基因组数据及相关基因分析信息,为后续的分子工作打下重要的基础。
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