苹果属二氢查尔酮分离体系的优化及对变形链球菌抑菌活性的研究

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二氢查尔酮类化合物属于类黄酮,在苹果属植物中种类丰富,含量高。二氢查尔酮类化合物的生物活性具有多样性。然而,迄今为止,除根皮苷外,其他二氢查尔酮类化合物纯品的分离纯化过程比较繁琐。前人虽对二氢查尔酮类化合物的分离纯化过程进行了优化,但大都集中在提取条件的改进。在本研究中,我们基于新的种质资源,建立了一种有利于二氢查尔酮类化合物分离纯化的技术体系;并选择变形链球菌这一主要致龋菌为研究对象,探讨苹果二氢查尔酮类化合物的抑菌活性。主要结果如下:1.通过高效液相色谱分析了2种苹果属种质资源(冬红海棠和亚当海棠)和2个苹果杂交后代(S1和T1)叶片中二氢查尔酮类化合物的种类。主要发现4种二氢查尔酮类化合物,分别为:3-羟基根皮苷、3-羟基三叶苷、根皮苷和三叶苷。其中冬红海棠叶片中4种二氢查尔酮化合物被全部检测到;亚当海棠叶片中仅检测到3-羟基三叶苷和三叶苷两种二氢查尔酮类化合物;杂交后代S1叶片中检测到3-羟基三叶苷和微量三叶苷;杂交后代T1叶片中仅含有三叶苷。2.使用柱层析比较了2种苹果属种质资源和2个苹果杂交后代叶片二氢查尔酮类化合物的分离纯化难易程度。结果表明:以冬红海棠叶片为提取原材料时,在经过提取、萃取及聚酰胺柱层析等分离纯化后,再过1次葡聚糖凝胶(Sephadex LH-20)柱层析只能得到根皮苷一种纯品,重复3-5次葡聚糖凝胶柱层析可得3-羟基三叶苷,但无法将3-羟基根皮苷和三叶苷分离。进一步使用C18反相柱层析可将3-羟基根皮苷和三叶苷分离。以亚当海棠叶片为提取原材料时,在经过聚酰胺柱层析等分离纯化后,再过1次葡聚糖凝胶(Sephadex LH-20)柱层析可以将三叶苷和3-羟基三叶苷分离,但纯度低于98%,需进行2-3次重结晶可得三叶苷纯品;重复1-3次葡聚糖凝胶可得3-羟基三叶苷纯品。以杂交后代S1为提取原材料时,经过聚酰胺柱层析一步可得纯度大于94%的3-羟基三叶苷,进行3-5次重结晶可得纯度高于98%的化合物。以杂交后代T1为提取材料时,经过聚酰胺柱层析可直接获得纯度高于98%的三叶苷纯品。3.通过体外抑菌试验,比较了7种二氢查尔酮类化合物在内的18种化合物对变形链球菌的抑菌活性。结果表明:在0.5 m M浓度处理下,阳性对照头孢噻肟钠的抑菌率为66.23%;18种化合物中仅有DL-苹果酸、抗坏血酸、紫云英苷和柠檬酸4种化合物对变形链球菌有轻微抑制效果,抑菌率分别为14.81%、11.50%、7.83%和7.65%,而二氢查尔酮类化合物无抑制效果。
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