【摘 要】
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金黄色葡萄球菌是引起奶牛乳房炎的主要病原菌之一,它对乳腺上皮细胞的黏附和定殖被认定为主要致病机制。因此,阻断金黄色葡萄球菌的黏附和定殖,可能是预防感染的有效策略。
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金黄色葡萄球菌是引起奶牛乳房炎的主要病原菌之一,它对乳腺上皮细胞的黏附和定殖被认定为主要致病机制。因此,阻断金黄色葡萄球菌的黏附和定殖,可能是预防感染的有效策略。纤连蛋白结合蛋白A(FnBPA)是与金黄色葡萄球菌致病性相关的重要的毒力因子。纤连蛋白结合蛋白A的A区(FnBPA-A)主要与纤维蛋白原(Fg)结合,D区(FnBPA-D)主要与纤维结合素(Fn)结合。本研究采用PCR技术对牛源金黄色葡萄球菌FnBPA-A和FnBPA-D进行特异性扩增,并构建克隆质粒。然后将目的片段与原核表达载体pET-32a(+)连接,并进行IPTG诱导表达。表达产物经SDS-PAGE电泳检测,显示重组目的蛋白FnBPA-A和FnBPA-D的分子量大小分别为102KDa和53KDa。为评价金黄色葡萄球菌黏附素蛋白FnBPA-A和FnBPA-D基因的免疫原性优劣,分别将纯化的重组原核表达FnBPA-A和FnBPA-D蛋白免疫新西兰白兔。通过ELISA方法检测免疫兔血清的抗体效价、细胞因子表达水平并进行T淋巴细胞增殖试验、全血调理吞噬试验。结果表明,在免疫35d抗体水平分别可达1：12800(FnBPA-A)、1:25600(FnBPA-D);同时,两者均能提高兔体内IL-2、IL-4、IL-10和IFN-y的含量,且FnBPA-D组显著高于FnBPA-A组(p<0.05)：FnBPA-D蛋白免疫组刺激指数显著高于FnBPA-A蛋白免疫组(p<0.05)；并且FnBPA-A、FnBPA-D免疫组的全血杀菌能力均显著高于对照组(p<0.05)。综上所述,FnBPA-A和FnBPA-D蛋白均可诱导机体产生较好的体液免疫和细胞免疫反应,且FnBPA-D较FnBPA-A效果更佳,更适合作为奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌亚单位疫苗的候选蛋白。
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