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衰老是复杂生物系统中的一个重要因素,是任何生物体必须出现的生命问题,是导致许多慢性病症的关键因素之一。锦灯笼药用研究价值丰富,在抗氧化作用方面的研究未见报道。本实验以秀丽隐杆线虫为衰老模型。通过体内,体外氧化应激、寿命、摆动、产卵、紫外应激和热应激等实验来检测研究锦灯笼果皮醇提物(Physalis alkekengi L.var.franchetii(Mast.)Makino pericarp ethanol extract,PPEE)、锦灯笼花萼醇提物(Physalis alkekengi L.var.franchetii(Mast.)Makino calyx ethanol extract,PCEE)、锦灯笼种子醇提物(Physalis alkekengi L.var.franchetii(Mast.)Makino seed ethanol extract,PSEE)对秀丽隐杆线虫抗氧化作用的研究。研究结果如下:通过实验检测PPEE、PCEE、PSEE清除体外自由基(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼,DPPH、2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐,ABTS)的能力。实验结果证明,1.0 mg/m L PPEE、1.0 mg/m L PCEE、1.0 mg/m L PSEE都存在体外直接清除DPPH、ABTS自由基的能力,而2.5 mg/m L PPEE、2.5 mg/m L PCEE、1.0 mg/m L PSEE清除DPPH和ABTS自由基的能力最强。通过PPEE、PCEE、PSEE对野生型秀丽隐杆线虫(N2)氧化应激实验。实验结果证明,在不同浓度下的PPEE、PCEE、PSEE均可以延长野生型N2线虫在氧化应激条件下的生存时间。2.5 mg/m L PPEE、2.5 mg/m L PCEE、1.0 mg/m L PSEE对延长氧化应激条件下N2线虫存活时间效果尤为明显,延长寿命时间由长到短依次是2.5mg/m L PPEE、2.5 mg/m L PCEE、1.0 mg/m L PSEE。通过实验检测PPEE、PCEE、PSEE对野生型N2线虫寿命、运动能力、产卵量、高温应激、紫外应激的影响。实验结果证明,2.5 mg/m L PPEE、2.5 mg/m L PCEE都可以明显提高野生型N2线虫的生存时间、运动能力、产卵量、高温和紫外应激能力,1.0 mg/m L PSEE对野生型N2线虫的寿命、运动能力和产卵量的影响无明显变化,但能提升野生型N2线虫高温和紫外应激能力。通过实验测定半胱氨酸(Cys)、维生素C(Vitamin C,VC)对PPEE、PCEE、PSEE的联合抗氧化作用。实验结果证明,Cys和PSEE联合液对DPPH自由基有协同抗氧化作用、Cys和PCEE联合液对ABTS自由基有协同抗氧化作用;VC和PSEE联合液对DPPH自由基有协同抗氧化作用、VC和PCEE联合液对DPPH自由基有协同抗氧化作用、VC和PSEE联合液对ABTS自由基有协同抗氧化作用。通过体内和体外抗氧化实验得出PPEE的抗氧化活性显著高于PCEE和PSEE,于是选择了2.5 mg/m L PPEE进行对N2线虫体内氧自由基含量的测定实验和q PCR实验。(1)体内氧自由基含量的测定实验:本研究以检测2.5 mg/m L PPEE对N2线虫体内活性氧(Reactive oxygen specie,ROS)水平的调节作用。结果表明,2.5mg/m LPPEE能明显降低野生型N2线虫体内ROS的含量,并展现出较强的抗氧化功能。(2)q PCR实验:通过检测有关抗氧化基因的表达水平,初步探索抗氧化作用及机理。结果表明,2.5 mg/m L PPEE对野生型N2线虫基因gst-4、gst-7、sod-3和hsp16.2的表达水平明显提升。为研究PPEE、PCEE、PSEE的抗衰老功能机制,研究3条信号通路的突变体线虫clk-1(qm30)、daf-2(e1368)、eat-2(ad1116)以及SKN-1转录因子skn-1(zu67)于氧化应激反应条件下的生存时间的变化。实验结果表明,2.5 mg/m L PPEE、2.5 mg/m L PCEE、1.0 mg/m L PSEE均能增加突变体线虫daf-2(e1368)的存活时间;仅有2.5mg/m LPPEE能增加突变体线虫daf-2(e1368)的生存时间;2.5 mg/m L PPEE、2.5 mg/m L PCEE、1.0 mg/m L PSEE对clk-1、skn-1突变体线虫的平均寿命并没有明显差异,表明锦灯笼乙醇提取物抗氧化作用很可能和线粒体信号通路有关,并可调节SKN-1转录因子,进而提高了线虫抗氧化应激水平。通过实验测定了2.5 mg/m L PPEE、2.5 mg/m L PCEE、1.0 mg/m L PSEE对线粒体clk-1突变体线虫和SKN-1转录因子skn-1突变体线虫存活时间的影响。实验结果证明,经过2.5 mg/m L PPEE、2.5 mg/m L PCEE、1.0 mg/m L PSEE的作用,clk-1和skn-1突变体线虫的寿命无明显改变,进而证明了锦灯笼醇提物的抗衰老生物活性来自于对线粒体功能的影响,以及对SKN-1转录因子的调节。所以,PPEE、PCEE、PSEE对秀丽隐杆线虫有着很重要的体内抗氧化生物学活性,并可以延长其寿命,其原理很有可能就是通过激活clk-1,进而提高相关抗氧化基因表达水平,提高其抗氧化应激能力,进而减缓机体坏死。