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鲟鱼是我国淡水养殖重要品种之一,在我国淡水养殖业中占重要地位。目前鲟鱼养殖业呈快速增长趋势,但随着鲟鱼养殖集约化和规模化程度不断提高,细菌性疾病不断发生。嗜水气单胞菌是弧菌科气单胞菌属成员,广泛存活在淡水、淤泥、土壤等环境,常常引起鱼类包括鲟鱼等以及两牺动物发生病死亡。当前,细菌性疾病防治多用抗生素及化学药物,但若长期不合理或不规范使用,引起细菌耐药现象出现,导致环境细菌污染严重等问题,而疫苗预防具有效果好和低污染等优点,已在鲟鱼养殖业中广泛应用。本研究在前期分离得到鲟鱼源嗜水气单胞菌的基础上,通过比较灭活条件包括甲醛浓度(0.05%、0.1%、0.2%、0.3%和0.4%)、灭活温度(4℃、28℃、30℃和37℃)和灭活时间(4h、8h、12h和24h),制备鲟鱼用嗜水气单胞菌灭活疫苗。然后选取鲟鱼140尾,随机分为对照组、疫苗组、佐剂组和疫苗+佐剂组,每组35尾,相应以无菌PBS溶液、灭活疫苗、黄芪多糖和灭活疫苗+黄芪多糖进行注射。于注射后第1d、7d、14d、21d和28d时,随机采集试验鲟尾静脉血液样本,5尾/组,采用ELISA测定鲟鱼血液常规生化指标(谷草转氨酶AST、谷丙转氨酶ALT、碱性磷酸酶ALP等)和免疫相关指标(超氧化物歧化酶SOD、溶菌酶LYZ、免疫抗体Ig G、酸性磷酸酶(ACP)和补体C3)。免疫结束后即第28d时,以新制备的嗜水气单胞菌液(2.5×10~8cfu/m L)进行注射攻毒,测定各个试验组的免疫保护率,同时于攻毒后第14d时,扑杀鲟鱼,每组5尾,采取鲟鱼肝脏、脾脏和肠组织进行病理切片,观察其病变情况。主要试验结果如下:(1)嗜水气单胞菌最优灭活条件:菌液置于4℃时,加甲醛终浓度为0.05%和0.1%,灭活24h均能检出细菌存活;28℃时,甲醛终浓度为0.05%,灭活24h能检出细菌存活,甲醛终浓度为0.1%,灭活4h能检出细菌存活;30℃时,甲醛终浓度为0.05%,灭活24h能检出细菌存活;37℃时,甲醛终浓度为0.05%,灭活4h能检出细菌存活,其余灭活条件下未检出细菌存活,经比较得出最优灭活条件:0.2%甲醛溶液、28℃灭活温度和8h灭活时间。(2)试验鲟鱼血液常规生化指标测定结果:第7d时,对照组T-BIC含量14.56±6.05umol/L为最高,疫苗+佐剂组含量11.46±5.85umol/L为最低,两组差异显著(P<0.05),对照组CREA含量85.06±22.36umol/L为最低,与疫苗组差异显著(P<0.05),对照组TP值和疫苗组、佐剂组数据差异显著(P<0.05),对照组TG含量最高,佐剂组含量最低,两组差异显著;第28d时,疫苗组ALP含量最高为,与对照组差异显著(P<0.05),对照组ALB含量含量最低为34.00±6.15g/L,佐剂组最高为41.88±4.24g/L,两组差异显著(P<0.05);其余未见差异显著(P>0.05)。(3)试验鲟鱼血液免疫相关指标测定结果:试验第7d后疫苗组和疫苗+佐剂组SOD活性均高于对照组,疫苗+佐剂组最高,疫苗组次之,28d时疫苗+佐剂组出现峰值为168.45±5.38u/m L,21d时疫苗组出现峰值为151.36±8.37u/m L,与对照组差异显著(P<0.05);试验开始后,佐剂组LYZ活性最高,21d时出现峰值为9.22±0.57U/L,与对照组差异显著(P<0.05);第1d、7d、21d和28d疫苗组Ig G含量最高,21d峰值为12.60±0.47ng/m L,与对照组差异显著(P<0.05);试验1d后,疫苗组ACP活性最高,第21d时出现峰值为10.51±0.64IU/L,与对照组差异显著(P<0.05);在试验第28 d对照组补体C3含量为153.96±6.96ug/m L,疫苗+佐剂组为141.02±8.54ug/m L,对照组高于疫苗+佐剂组,并差异显著(P<0.05),其余未见差异显著(P>0.05)。(4)试验鲟鱼免疫保护率测定结果:对试验鲟鱼攻毒后,第3d对照组开始出现鲟鱼死亡,连续观察14d中,对照组鲟鱼全部死亡,疫苗组死亡2条,佐剂组死亡4条,经计算对照组、疫苗组、佐剂组和疫苗+佐剂组的免疫保护率分别为0%、80%、60%、100%。(5)试验鲟鱼攻毒后病变观察结果:攻毒后第14 d(试验第42 d)对照组,肠组织出现炎症细胞,细胞坏死脱落等病理变化;肝脏组织肝索排列紊乱,肝细胞空泡变性;脾脏出现坏死区域;佐剂组肠、肝、脾组织出现轻微病理变化;疫苗组和疫苗+佐剂组未见明显病理变化。综上所述,本研究成功制备了鲟鱼用嗜水气单胞菌灭活疫苗,经免疫注射后未能引起鲟鱼常规生化指标异常变化,有效提高免疫相关指标,对嗜水气单胞菌攻毒的免疫保护率达80%以上,且对鲟鱼肝脏、脾脏和肠道组织无明显损伤作用。这些研究结果为鲟鱼嗜水气单胞菌病的防治提供理论参考。