猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的高度传染性疾病,临床上成年猪表现为厌食、发热,妊娠母猪发生流产、早产、产死胎、弱仔、木乃伊胎,仔猪呼吸困难等症状,猪群中一旦感染该病毒便很难根除。PRRSV广泛传播于世界各个地区,我国华东、华南区于2006年爆发该传染病,给我国的养殖业发展造成重创。迄今为止,主要通过疫苗免疫的手段进行预防和治疗。但一方面疫苗免疫存在返毒威胁的危险性,另一方面PRRSV进化出各种逃避宿主的免疫机制,导致疫苗的应用效果受到限制。药物是病毒性疾病防治的第二道防线,但目前尚未出现被批准用于防治PRRS的药物。近年来,大量研究表明天然低毒的中草药对病毒有显著的预防治疗作用,因此,从天然化合物中筛选有效的抗病毒药物成为当前研究的热点。本试验系统评价了双氢青蒿素在体外对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)作用效果。采用间接免疫荧光法从青蒿素类化合物中筛选出对PRRS病毒有明显抑制效果的单体——双氢青蒿素和青蒿琥酯,同时由于双氢青蒿素具有比其他同类药物易溶、低毒的特性,本研究着重选择了双氢青蒿素作为后期试验中抗PRRS病毒活性的研究药物,并进一步探讨其作用机理。首先建立了PRRSV感染Marc-145细胞的体外药效评价模型,MTT试验确定双氢青蒿素的药效,间接免疫荧光法确定最佳药物作用浓度。然后通过荧光定量PCR和蛋白免疫印迹(Western blot)实验,在病毒感染48 h后测定双氢青蒿素的抗PRRSV药效。再分三种不同的作用模式考察双氢青蒿素对PRRS病毒感染Marc-145细胞不同阶段的影响,即药物与病毒直接作用,药物预先作用于细胞,药物作用病毒感染细胞的不同阶段,运用RT-PCR检测技术测定病毒NSP-9 m RNA的表达水平。双氢青蒿素在0.6、1.25、2.5μg/m L的浓度对病毒的抑制作用呈现出良好的量效关系,且不影响细胞的生长状态。荧光定量PCR和Western blot结果显示,双氢青蒿素对PRRSV NSP-9 m RNA和N蛋白的表达具有显著的抑制效果,且呈现良好的量效关系。另外,在病毒感染细胞的吸附、内化、合成、释放不同阶段,双氢青蒿素均显示出不同程度且具有量效关系的抑制作用。而在双氢青蒿素与病毒直接作用和预先作用细胞的结果中,均没有表现出显著差异性。说明双氢青蒿素的作用机制可能是通过抑制病毒感染细胞的不同阶段发挥抗病毒作用,而对病毒粒子本身没有作用,也不能事先作用于细胞受体。本试验首次证明了双氢青蒿素在体外具有抗PRRSV的作用,为研发新的预防与治疗猪繁殖与呼吸综合征病毒药物提供了实验依据。